Hạt chitosan bị kết tủa

[truong369]

Chào các anh chị,

Hiện em đang làm hạt chitosan bằng phương pháp ionic gelation với TPP,
Nồng độ dịch chitosan 0.25 %
TPP 0.25 %

Hạt được tạo ra bằng cách khuấy dịch chitosan bằng máy khuấy từ, tốc độ 17000 rpm.
TPP được cho nhỏ giọt xuống dịch chitosan đang được khuấy trong 1 giờ, tỉ lệ chitosan:TPP = 7:1 (w/w)
Sau khi cho hết TPP vào, tiếp tục khuấy thêm 1 giờ nữa

Hạt làm xong được đem đị chụp SEM, đường kính trng bình khoảng 20 nm

Hạt được thu hồi bằng ly tâm 10.000 rpm, 10 phút, rửa với nước cất 3 lần.

--------------------------------------------
Vấn đề của em gặp phải là khi load protein có pI 6.2 vào hạt (sử dụng đệm PBS pH 7.4), thì hạt bị kết tủa, không huyền phù trở lại được
Cách làm:
hạt chiotsan ướt (sau khi rửa 3 lần bời nước cất) trộn với 1ml protein có nồng độ 100ug/ml
Ly tâm thu hạt ỏ 10.000 rpm, 10 phút. Ở bước này hạt bị tủa.
--------------------------------------------

Câu hỏi của e là:

• pH em dùng ở đây có ảnh hưởng đến việc tủa của hạt k ? (vì chitosan bị tủa ở pH khoảng 6.5, nhưng đó là chiotsan dạng tự do, còn hạt chitosan của em là dạng đã bị crosslink bời TPP)
• Đệm PBS có góp phần gây tủa hạt chiotsan hay k? (cái này có bài trên researchgate nói có, còn mấy bài báo cứ đăng là xài PBS pH 7.2 - 7.4)
• Với hạt chiotsan thì nên xài đệm nào cho tốt ?

Bài nó hơi dài, cám ơn anh chị quan tâm và giúp đỡ
Trường.