Đo mật độ tế bào bằng OD

[Mạch Trần Phương Thảo]

Em đang muốn đo mật độ tế bào nhưng ko muốn sử dụng phương pháp cấy trên đĩa thạch vì thời gian quá lâu và không chuẩn. Em muốn đo bằng phương pháp đo quang lập đường chuẩn mật độ cho chủng Bacillus spp. nhưng phương pháp mà em biết là ủ liên tục và lấy mẫu cách nhau 1-2h, lấy 1/2 đo quang, 1/2 đổ đĩa thạch đếm khuẩn lạc, từ đó suy từ đo quang kết hợp mật độ rồi tính ra đường chuẩn. Em có tham khảo bài short communication lập sự tương quan giữa OD với mật độ tế bào và sinh khối nhưng tiếc rằng thiết bị đáp ứng ko được (ly tâm khối lượng quá bé), cân ko chính xác, và ko có thời gian để cấy liên tục. Có cách nào hay có đường chuẩn nào nghiên cứu công bố rồi ko, em tìm hoài chưa ra
http://www.academicjournals.org/ajmr/PDF/Pdf2012/9 June/Kim et al.pdf

 

[Mạch Trần Phương Thảo]

Em từ bỏ cái kiểu đo mật độ kết hợp đo quang tạo đường chuẩn rồi vì 1h cấy 1 lần toàn bộ nồng độ 4-11 chắc tiêu.
Có 1 phương pháp các anh chị bày lại nhưng chưa thử, post lên cho ai từng có ý định dại dột thì làm.
Ống dịch tăng sinh, cho vào 1 vòng que cấy, ủ.Đo OD. <--Ống 1
Lấy ống dịch ko chứa vi khuẩn pha loãng dịch ống 1 cho đến khi đo mật độ đạt 0,06 rồi mang đi sử dụng, xem như mật độ đạt 10^6.
Thực ra kiểm tra sau khi tăng sinh bằng 10ml BHB trong 24h ở nhiệt độ phòng , Bacillus subtilis đạt 0^6-10^7 (đếm khuẩn lạc) nên ko cần thiết làm thí nghiệm này nữa.
Thanks,

 

[Thangbiotek]

Mình có phương pháp này bạn tham khảo nhé, k cần theo thời gian, chỉ cần đếm 3,4 mẫu, coi như là các điểm là được, bạn có thể cấy nhiều điểm hơn hoặc nhiều lần để có thống kê cho chính xác đồng thời luyện tay cấy luôn.
Thí nghiệm như sau: nuôi dịch sinh khối sao cho khi đạt được mật độ cao nhất. tiến hành ly tâm thu sinh khối sau đó dùng nước muối pha loãng 1/10, gọi là dịch 10. Dùng dịch 10 pha loãng 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000... lần lượt gọi là dịch 0, dịch 1, dịch 2, dịch 3... sau đó đồng thời với việc đo OD thì cấy đếm. rồi dựng đường chuẩn với 2 thông số OD và mật độ (CFU/ml). Muốn chính xác hơn thì bạn nên làm lặp lại vài lần, khi dựng đường chuẩn mà R^2 khoảng 0.98.., 0.99.. là ok, nghĩa là khả năng đếm của bạn rất tốt.

 

[Mạch Trần Phương Thảo]

ly tâm thu sinh khối trên thiết bị như thế nào để đạt được khối lượng mình cần mà nó không bị nhiễm nhỉ?
Trường đh Nha Trang mình máy ly tâm to vật vã, ống như cái cối cũng có nhưng chủ yếu là ống côn nắp cam, tiếc là nó to lắm, biết thu và lấy cặn làm sao cho đạt cỡ bạn nói nhỉ.
Vậy muốn đạt 1/10 thì khối lượng cặn phải được bao nhiêu thì chấp nhận?

 

[Thangbiotek]

ly tâm thu sinh khối trên thiết bị như thế nào để đạt được khối lượng mình cần mà nó không bị nhiễm nhỉ?
Trường đh Nha Trang mình máy ly tâm to vật vã, ống như cái cối cũng có nhưng chủ yếu là ống côn nắp cam, tiếc là nó to lắm, biết thu và lấy cặn làm sao cho đạt cỡ bạn nói nhỉ.
Vậy muốn đạt 1/10 thì khối lượng cặn phải được bao nhiêu thì chấp nhận?

K có máy ly tâm ly tâm ống 15ml hay 50ml ah?
Còn vấn đề bạn hỏi làm sao thu mà k nhiễm thì đó là do kĩ thuật của bạn thôi. Hỏi lại các thầy cô xem làm thế nào k nhiễm nhé.
Còn khối lượng sinh khối bao nhiêu k quan trọng mà quan trọng là bạn cứ giảm 1/10 thể tích dịch là được.
Chúc bạn thành công

 

[Ngân Vũ]

mọi người ơi em cũng phải đo mật độ quang của con lactis. Nhưng em không hiểu sao khi đo trong vòng 24h, cách 2h đo 1 lần thì mật độ của nó không theo như chu kì sinh trưởng bình thường mà nó cứ tăng lên, thậm chí là lên đến hơn 1. Em nghĩ là đã sai ở đâu đó vì khi em đo không pha loãng dịch nuôi cấy ra ạ. Có anh chị nào nói cho em cách đo chính xác như thế nào được không ạ ?. Em cảm ơn !