Quy trình chuyển gen BT vào cây bắp ( Các bạn giúp mình với )

[muacauvong]

Mọi người ơi mình đang cần tài liệu về quy trình chuyển gen BT vào cây bắp ( các giai đoạn tiến hành cụ thể ).
Bạn nào có tài liệu về vấn đề đó thì cho mình xin với nha.
Cảm ơn các bạn nhiều lắm.

 

[nguyenquocdong89]

Mọi người ơi mình đang cần tài liệu về quy trình chuyển gen BT vào cây bắp ( các giai đoạn tiến hành cụ thể ).
Bạn nào có tài liệu về vấn đề đó thì cho mình xin với nha.
Cảm ơn các bạn nhiều lắm.

Bạn tiến hành làm chuyển gene này ở Viện nào đó? Mình có tài liệu về chuyển gene khá nhiều nhưng chủ yếu là chuyển gene vào đậu tương thôi, và chủ yếu là bài báo về chuyển gene gián tiếp thông qua vii khuẩn agrobacterium. và có thể bạn tham khảo được đó. Nhưng bạn chuyển gene trục tiếp hay gián tiếp thông qua vi khuẩn agrobacterium? Phải nói rõ thì mình mới biết và cho tài liệu được. Nếu có lấy tài liệu về chuyển gene đậu tương thì gửi email qua email của mình. nguyenquocdong89@gmail.com. Thân

 

[muacauvong]

Bạn tiến hành làm chuyển gene này ở Viện nào đó? Mình có tài liệu về chuyển gene khá nhiều nhưng chủ yếu là chuyển gene vào đậu tương thôi, và chủ yếu là bài báo về chuyển gene gián tiếp thông qua vii khuẩn agrobacterium. và có thể bạn tham khảo được đó. Nhưng bạn chuyển gene trục tiếp hay gián tiếp thông qua vi khuẩn agrobacterium? Phải nói rõ thì mình mới biết và cho tài liệu được. Nếu có lấy tài liệu về chuyển gene đậu tương thì gửi email qua email của mình. nguyenquocdong89@gmail.com. Thân

Cảm ơn bạn nhiều nha, mình cần tài liệu cho bài thuyết trình môn công nghệ sinh học đó. Đề tài của mình là về cây bắp BT, gồm các vấn đề : giới thiệu tổng quan, độc tính của sản phẩm và kỹ thuật chuyển gen. Nếu bạn nào có tài liệu thì gửi giúp mình vào mail : namli74@yahoo.com.vn hoặc minsunfanfic@yahoo.com nhé.
Chân thành cảm ơn bạn nguyenquocdong89 và tất cả mọi người nữa.

 

[Biologist]

Mọi người ơi mình đang cần tài liệu về quy trình chuyển gen BT vào cây bắp ( các giai đoạn tiến hành cụ thể ).
Bạn nào có tài liệu về vấn đề đó thì cho mình xin với nha.
Cảm ơn các bạn nhiều lắm.

Bạn muacauvong:
Bt gene đã được nghiên cứu hơn 100 năm rồi, cho nên tài liệu về lĩnh vực này nhiều vô kể. Tôi nghĩ rằng Bạn có thể đọc review sau đây về tìm một vài references có liên quan trực tiếp đến việc Bạn đang làm. Chúc thành công.

Bacillus thuringiensis: a century of research, development and commercial applications. Georgina Sanahuja, Raviraj Banakar, Richard M. Twyman, Teresa Capell, Paul Christou1Plant Biotechnology Journal. Volume 9, Issue 3, pages 283–300, April 2011.

www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21375687

 

[muacauvong]

Mình vừa tìm được sơ đồ này, các bạn có thể giải thích giúp mình hiểu rõ về các bước ( theo như hình ) không ?

 

[nguyenquocdong89]

Mình vừa tìm được sơ đồ này, các bạn có thể giải thích giúp mình hiểu rõ về các bước ( theo như hình ) không ?

Oh cái này dễ mà. trước tiên cái hình đầu đó là VI KHUẨN đã mang gene mục tiêu (gen đích cần chuyển) gen này đẫ được trải qua quá trình tách dòng và gắn vào plasmid( quá trình tách dòng là cả một quá trình phức tạp nên mình không nói ở đây, nêu thấy hứng thì mình truyền đạt cho chút)hihi. Khi đã kiểm tra chính sác là gene đó rồi, song đó tăng sinh khuẩn đó lên với số lượng lớn. Tách lấy gene mục tiêu rồi thu lại gene đó, mang gene đó trộn gene đó với hạt vàng hoặc tungsteng (gần như hạt vàng, rất nhỏ). Vì ảnh này là chuyển gene trực tiếp bằng súng bắn gene. ĐÂY là chuyển gene NGÔ, cái này viện di truyền ( phòng thí nghiệm trọng điểm đã làm). Đồng thời với việc nuôi và tách gene từ khuẩn bạn cũng phải nuôi cấy mô PHÔI NGÔ, thường chọn phôi 7-10 ngày tuổi là tốt nhất, phù hợp với chuyển gene ( tách khó lắm đấy her her, mình làm rùi). Nuôi mô sẹo là ok nhất bạn ah, hoạc nuôi cấy tạo cây chính thức (giai đoạn được 4-5 ngày mang đi biến nạp là ok nhất.
Với mẫu và gen đã được chuản bị ở trên tiến hành bắn gene trực tiếp thui ( hic quy trình bắn và bắn như thế nào không phải ai cũng được bắn đâu. Hạt vàng mà hjhj). Khi bắn gene này sẽ sẩy ra trường hợp đó là khi hạt vàng hoặc tung steng với lực áp xuất bắn mạnh sẽ làm tế bào dập nát khá nhiều, các hạt đó có mang gene các gene này được giữ lại ở vị trí nào đó trong tế bào như nhân, TBC nhưng mục tiêu của chúng ta là gen đó ở nhân. Hạt vàng đi đâu kệ nó không quan tâm nữa, nó có thể ở trong tế bào nhưng không ảnh hưởng tới quá trình phát triển của tế bào nhiều lắm đâu. RẤT NHIỀU tế bào bị chết sau khi bắn gene đó ( do hạt vàng làm tế bào nát, không phục hồi được). Nhứng gene được vào đúng vị trí nhân có thể sẽ gây nên quá trình insert vào genenome của tế bào thành công ( quá tốt), nhưng cũng có gene vào đến nhân nhưng hic hic không insert được ( quá phí, và tiecs nữa).
Sau đó nuôi phục hồi tế bào sau chuyển gene tầm 5 ngày (tùy loại cây), sau thời gian nuôi phục hồi bạn tiến hành chọn lọc cây đã được chuyển gen ( đoạn gene mình chuyển có gene chọn lọc thực vật là hygromycin, ppt, đường manost.... nhiều lắm, xem kỹ plasmid là biết được ngay. cây nào sống là ok ( nhưng chưa chắc mang gene 100% đâu nhé, còn nhiều bước nữa) (cũng có nhiều tế bào gene được chuyển lại nằm ở hệ gene ty thể, lạp thể ( ở tế bào chất) nó vẫn không chết khi sàng lọc hoho. Tiếp theo nuôi cây, ra cây, tiến hành kiểm tra PCR với mồi đặc hiệu với gene mục tiêu. Nếu PCR lên ta kiểm tra trực tiếp (nếu chuyển gene kháng thuốc diệt cỏ thử nghiệm bằng cách phun thuốc diệt cỏ ( 3 lần nhé, cách nhau hơi xa một chút), chuyển gene kháng sâu thử nghiệm bằng thả sâu và xem tỷ lệ sâu chết ( sâu phải đúng là loại sâu mà bị chết do protein gene đích tạo ra nhé). Nếu sâu chết hoặc cỏ chết mà cây không sao ( vui rùi đó, nhưng chưa ổn) tiến hành lai phân tử tiếp sau đó, các bước như saotherblot ( kiểm tra sự có mặt của gene đích trong hệ gene), notherblot ( kiểm tra sự phiên mã của gene mục tiêu) có từ DNA sang RNA không, kiểm tra westblot (kiểm tra xem có tạo ra protein không) kiểm tra dịch mã của RNA sang Protein. hehe nếu ok hết cứ để cây ra hoa kết trái thu quả thôi. Nhưng vẫn chưa ổn đâu, lấy hạt đó trồng đúng mùa vụ. Khi lên cây con tiếp tục kiểm tra T1 từ bước tách DNA đến PCR và cuối cùng là WESTBLOT, kiểm tra tới đời T3 mà vẫn tốt (HAHA BẠN CÓ MỘT GIỐNG MỚI, CHÚC MỪNG, CHÚC MỪNG). Sở dĩ phải kiểm tra tới T3 để xem sự di truyền gene mục tiêu sang đời sau có được tiến hành không thôi (nhưng quan trọng đó).
ah chú ý trong quá trình sàng lọc bạn rất rễ bị trường hợp THỂ KHẢM. Đó là do bạn sàng lọc muộn quá.
Mnh làm đậu tương chuyển gene rùi nhưng hàng ngàn mẫu không được mẫu nào đâu, sàng lọc vẫn sống vài cây, ra đất ok, nhưng PCR gene mục tiêu không lên. Nhưng chắc mình sai lầm chỗ nào đó.
Nếu chuyển gene thành công bạn phải làm mất khoảng thời gian khá lâu đó, tính hàng năm. Nhưng vì một giống mới và tốt không nên sợ mà rút lui sớm nhé.
Thân.