Bạn mình xài binary vector kích thước 11 kpb và insert tầm khoảng 2.5. Khó nối nhưng cứ kiên trì rồi sẽ ra (có thể thử biến đổi các tỉ lệ vector:insert). Bạn nhớ xử lý Phosphatase vector trước nếu là blunt end ligation. Khi biến nạp thì ly tâm tế bào xuống rồi hút bớt LB ra còn lại tầm khoảng...
Skim milk dùng để ngăn không cho kháng thể tương tác không đặc hiệu với màng lai (những vùng không có protein của bạn). BSA cũng có tác dụng tương tự nhưng skim milk rẻ hơn nên được ưa chuộng hơn.
Nếu bạn làm Western thì gđ blocking có thể là 1h đến overnight ở RT (khoảng 25-30 độ) hoặc 4 độ...
Cái AKTA FPLC hiện giờ tầm bao nhiêu tiền một cái nhỉ? Cáu thật. Số liệu cứ dồn đống vì outsource purification cho một lab khác mà lab kia thì cứ đủng đà đủng đỉnh. Gần 2 năm rồi mà mỗi setup cái đk tinh sạch cũng làm không được.
Bạn Hòa nên học cách nhờ lấy báo.
NCBI chỉ là portal để bạn search báo. Khi tìm ra bài báo rồi ở góc trên bên phải sẽ có link trực tiếp đến bài báo. Sau khi link đến bài báo lại có link đến file pdf. Để tiết kiệm thời gian và công sức cho người cho báo bạn nên tìm đến tận link pdf và paste link...
Nếu dịch khung đọc thì không được vì đây là domain tương đồng với một domain của các protein tương đồng trên genebank.
Tốt nhất là paste cái kết quả cái nhẩy:
Query 2116 SSDYMDMQMRDPEDRAEGITVGAGRAILSNRISHFLNIKGARYDHSLAVHA*PF*LMNSM 2295
+SDY DMQ RDPEDR ITVG GRAI++NR+SHFLNIKG...
Mình gặp một vấn đề nhờ chuyên gia cho lời khuyên.
Mình vừa có được full sequence của 2 genes nhờ degenerate primer PCR và primer walking. Phân tích trình tự bằng blastx tìm thấy gene tương đồng trên genebank. Một trong 2 gene mã hóa cho multidomain protein. Những domain đầu không có vấn đề gì...
Hằng số cân bằng:
K = [AA']/[A][A']
T không đổi nên bỏ qua T.
Thể tích không đổi nên xem nồng độ = lượng chất có trong dung dịch luôn.
Nếu có x mol [AA'] được tạo thành thì:
K = x/(a-x)(b-x)
Giải phương trình này được nghiệm dương x thì lấy x đó.
Không hiểu tại sao lại có 2 phương trình phản...
PC = Positive control.
Ví dụ ở trên 1 forum nó trả lời:
When you heat the DNA to 100 degrees the large input of energy is sufficient to break the hydrogen bonds between the bases that keep the two strands together. Slow cooling promotes annealing of the two strands as this energy is gradually...
Hihi. Ở trên có nhấn mạnh đến "các yếu tố khác" nữa rồi mà. Ví dụ đến một nồng độ nhất định thì reannealing của products sẽ chiếm ưu thế so với bắt cặp với mồi và do đó cũng sẽ không có thêm nhiều products nếu tăng thêm chu kỳ.
Có thể hình dung yếu tố enzyme bão hòa sẽ nằm đâu đó ở gần cuối của...
Sợi đơn bạn ạ.
Về nguyên tắc thì sợi DNA chỉ reanneal khi nhiệt độ giảm từ từ và nồng độ muối cao (bạn có thể search google). Còn làm lạnh đột ngột thế này thì đa số sẽ ở sợi đơn. Khi bạn cho vào chai lai ở 65 độ, sẽ có trường hợp DNA reanneal với nhau, có trường hợp sẽ hybridize với samples. Vì...
Đúng đó bạn Thọ.
Để giải thích Vmax, người ta nói đến turnover rate của enzyme. Tức bao nhiêu cơ chất enzyme có thể làm việc với trong 1 đơn vị thời gian. Giả dụ nồng độ enzyme là cố định, thì tốc độ phản ứng ban đầu sẽ phụ thuộc nồng độ cơ chất (khả năng bắt gặp giữa cơ chất với enzyme), cho...
Bạn Thọ nên xem phần động học enzyme. Vmax. Ở đây nói đến tốc độ tăng chứ không phải số products tuyệt đối bởi số này sẽ vẫn tăng nhưng không phải hàm mũ nữa.
Thường thì bạn dùng từ 0.25-1ul enzyme. Như vậy chỉ cần số products tăng lên 4 lần so với khi dùng 0.25 ul enzyme thì enzyme đã có thể...
Tôi cũng ủng hộ hội bionet. Trong tình hình sinh học èo ọt ở VN hiện nay, có được người dám nghĩ dám làm như anh Hải là rất đáng quý. Tuy không đi chung đường nhưng chúng tôi sẽ hỗ trợ về mặt chuyên môn nếu hội có nhu cầu.
Làm KH được một thời gian tôi thấy ranh giới giữa lương thiện với mưu mô...
hihi. Câu này giống câu mình ra cho học sinh cách đây mấy năm quá.
Nó nằm trong sách này:The basics from background to bench - PCR (M.J. Mc Pherson & S.G Moller.
Nguyên văn (TA) nhé:
The plateau phase is reached as a consequence of changes in the relative
concentrations of certain components of...
Không biết protocol khác thế nào chứ protocol lab mình thì không cần. Sau khi đun 100% 10 phút và làm lạnh nhanh trong đá >2 phút, rồi cho vào lai ở 65 độ C thì đảm bảo lai tốt. Có thể các nhiệt độ này, và sự thay đổi nhiệt độ đột ngột như vậy làm cho cấu trúc bậc 2 khó tạo thành.
Dạ em không. Em làm theo protocol của lab. Xem ra chị xem lại cái substrate enzyme reaction rồi.
Riêng chuyện lai không ra thì cũng có trường hợp đó. Nhớ không nhầm thì hồi xưa có bài báo trên diễn đàn về Paul Nurse làm mấy cái gene Cdc ở người dùng probe của nấm men mãi cũng không ra đấy.
Em đã từng làm thất bại hybridization vì lượng mồi quá ít. Protocol của lab cứ bảo là chỉ dùng 20ng DNA. Nhưng probe nhỏ (<400 bp) thì khi elution rất dễ mất mát. Chính vì vậy em dùng tới 10 ul/50 ul PCR reaction để làm probe và cho kết quả mỹ mãn.
Về vấn đề của chị thì 97% chắc là đủ để lai tốt...
This site uses cookies to help personalise content, tailor your experience and to keep you logged in if you register.
By continuing to use this site, you are consenting to our use of cookies.