hỏi về vai trò của Mg++ trong phản ứng PCR

[nalsinhk]

Các bạn, các anh chị em cho mình hỏi cái này nhé.

Mg++ có vai trò như thế nào trong PCR (mong các bạn giúp cho), mình cần vai trò thật sự chính xác của Mg++ (như là vai trò đối với ADN polymerase thì sự tương tác như thế nào và mối quan hệ phân tử giữa chúng, bao nhiêu Mg++ làm coenzym cho 1 phân tử ADN pol) và Mg++ có tương tác như nào với dNTP và mạch ADN khuôn, mồi nữa (tương tác chính xác thì tốt quá)

cảm ơn các bạn trước.

 

[cherry]

Các bạn, các anh chị em cho mình hỏi cái này nhé.

Mg++ có vai trò như thế nào trong PCR (mong các bạn giúp cho), mình cần vai trò thật sự chính xác của Mg++ (như là vai trò đối với ADN polymerase thì sự tương tác như thế nào và mối quan hệ phân tử giữa chúng, bao nhiêu Mg++ làm coenzym cho 1 phân tử ADN pol) và Mg++ có tương tác như nào với dNTP và mạch ADN khuôn, mồi nữa (tương tác chính xác thì tốt quá)

cảm ơn các bạn trước.

Gui ban thong tinh ve cac dieu kien Mg cho PCR

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Ít quá cũng không tốt mà nhiều quá cũng không tốt. Chả thế mà error prone người ta lại add excess Mg++
Với lại có nguyên tắc total Mg++ = free Mg++ + dNTP associated Mg++
mà free Mg++ ~ 1.2-1.3 tot nhat.

 

[nalsinhk]

cảm ơn Cherry và anh lương! các thông tin rất bổ ích
mình cũng đã làm về PCR, và chậy rất ngon, khi tối ưu thì mình dựa vào sách và các bài báo thôi. Như trong file của cherry gửi cho mình, thì nồng độ Mg++ phụ thuộc vào rất nhiều thành phần khác. và mình cũng biết là khi làm chắc mình phải tối ưu cho đến khi chạy ngon. Nhưng mình vẫn muốn biết ví dụ như là bao nhiêu Mg++ sẽ tương tác với 1phân tử Taq (và có hình về liên kết phân tử, lực tương tác thì hay quá). hoặc như mình biết là nếu trong mẫu có EDTA, thì cần 2ion Mg++ để trung hòa được lực liên kết (tức là như thế thì EDTA sẽ ko ảnh hưởng đến PCR nữa). và Mg++ với dNTP nữa, nó có tác động gì tới dNTP (có phải là làm giảm lực liên kết giữa 2 nu không? (điều này để dễ hình thành liên kết 5'-3')).
hoặc như công thức của anh Lương : total Mg++ = free Mg++ + dNTP associated Mg++
mà free Mg++ ~ 1.2-1.3 tot nhat -> vậy dNTP associated Mg++ thì như thế nào?
cảm ơn mọi người