Tái gập cuộn inusulin

[Ngô Thị Thu Ngân]

Em đang làm về refold insulin theo phương pháp pulse renaturation (dựa vào bài báo), sử dụng tác nhân oxi hóa khử là cặp cysteine/cystine như sau:
+ Buffer refold: + Tris 10mM
+ glycine 10mM
+ EDTA 1mM
+ cysteine 0.5mM
+ cystine 4.5mM
+ [mini-proinsulin]bđ = 4.5mg/ml
+ [mini-proinsulin] cuối = 0.5mg/ml
+ Cho mẫu vào buffer chuẩn pH về 11.5
+ Tiến hành pulse mẫu theo thời gian nhất định ( 4h pulse một lần)
+ Tiến hành refold trong 36h, ở 10oC
Lúc đầu sau khi refold xong em chạy kiểm tra bằng HPLC, có ra một peak nhưng rất nhỏ, sau đó không làm ra nữa, em làm một thời gian nữa vẫn khồng ra.
Các anh chị, các bạn có ai đang làm về vấn đề này thì góp ý cho em với!

 

[Nguyễn Phước Hùng]

Em đang làm về refold insulin theo phương pháp pulse renaturation (dựa vào bài báo), sử dụng tác nhân oxi hóa khử là cặp cysteine/cystine như sau:
+ Buffer refold: + Tris 10mM
+ glycine 10mM
+ EDTA 1mM
+ cysteine 0.5mM
+ cystine 4.5mM
+ [mini-proinsulin]bđ = 4.5mg/ml
+ [mini-proinsulin] cuối = 0.5mg/ml
+ Cho mẫu vào buffer chuẩn pH về 11.5
+ Tiến hành pulse mẫu theo thời gian nhất định ( 4h pulse một lần)
+ Tiến hành refold trong 36h, ở 10oC
Lúc đầu sau khi refold xong em chạy kiểm tra bằng HPLC, có ra một peak nhưng rất nhỏ, sau đó không làm ra nữa, em làm một thời gian nữa vẫn khồng ra.
Các anh chị, các bạn có ai đang làm về vấn đề này thì góp ý cho em với!

Không phải lab của bạn có 1 chuyên gia làm về tinh chế và protein refolding đó sao? Hỏi người đó là chắc ăn nhất.^^

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

nếu mà có nghi ngờ thì viết thư hỏi luôn tác giả ấy bạn ạ.

 

[Ngô Thị Thu Ngân]

Không phải lab của bạn có 1 chuyên gia làm về tinh chế và protein refolding đó sao? Hỏi người đó là chắc ăn nhất.^^

Hiện tại em và chị hướng dẫn vẫn chưa làm ra và vẫn đang tìm nguyên nhân, nhưng mọi thứ không được tốt lắm, em vẫn chưa tìm được tại sao??? . Em không biết phòng có chuyên gia về tinh chế và refold, cảm ơn anh đã góp ý!