Polymorphism detection!?

[orion8x]

Iem đang thắc mắc là có bao nhiu cách để detect polymorphism của 1 gene!? Những cách có thể detect đc zogosity(homologous/heterozygous) nhá. Ngoài mấy cái basic như PCR-RFLP hay southern blot ra.

 

[Ho Huu Tho]

Orionx thử tham khảo bài tổng quan này xem có ích không nhé:
Single nucleotide polymorphism genotyping: biochemistry, protocol, cost and throughput
http://www.nature.com/tpj/journal/v3/n2/pdf/6500167a.pdf

 

[Nguyễn Thy Ngọc]

Các anh chị có thể chỉ thêm cho em về cách sử dụng kĩ thuật RFLP để detect polymorphism của 1 gene không ạ. Em đang tìm hiểu về cái này mà đọc tài liệu thấy không vỡ ra được nhiều lắm.
Cảm ơn các anh chị rất nhiều ạ!!

 

[orion8x]

Em nên đọc mấy cái Article chứ đừng đọc trong wiki khó hiểu.
RFLP thường là PCR-RFLP couple. Trước hết dùng PCR nhân đoạn DNA có chứa Polymorphism (Thường là SNPs). Sau đó dùng 1, hoặc 2 RE để cắt sản phẩm PCR đó ra. Nếu đúng là polymorphism đó thì kết quả sẽ có 2 vạch, kg phải thì 1 vạch. Heterozygote thì 3 vạch.
Vd: Polymorphism của 1 allele là ATG A/G CC (polymorphisms là A hoặc G). RE đc chọn sẽ có điểm cắt là ATGA|CC. Nếu kết quả là 2 vạch thì sẽ là A polymorphism (sản phẩm PCR đc cắt làm đôi). Nếu kết quả ra 1 vạch là G polymorphism (RE kg cắt đc đoạn sản phẩm PCR). Nếu ra 3 vạch thì đó là Heterozygote của A và G polymorphism.

 

[Nguyễn Thy Ngọc]

Trước hết dùng PCR nhân đoạn DNA có chứa Polymorphism (Thường là SNPs). Sau đó dùng 1, hoặc 2 RE để cắt sản phẩm PCR đó ra
Trong phản ứng PCR template của mình là DNA tổng hay là gì hả chị, nếu gen của mình chưa biết trình tự thì sao ạ.
Một số phản ứng RFLP-PCR còn có sử dụng đến các đoạn STR, VNTR của gen. Tác dụng của chúng là gì ạ?!
Thanks chị

 

[orion8x]

Hmm, a kg hỉu câu hỏi của e lắm. a làm thì lấy stock DNA extract, mang đi PCR, sản phẩm là 400-800 bps có polymorphism ở giữa.
Câu sau chắc em đùa, kg biết trình tự gene thì làm sau biết đc polymorphism của nó
Phần STR và VNTR anh kg hiểu lắm, hình như tiết đó a ngủ trong lớp , nên kg giúp e đc.