@Paltin: email của mình là dumucc@yahoo.com. Mong được làm quen với bạn.
@Bác Lương: Không biết trình độ bác Lương giỏi hay bác nói quá chứ lab tôi load 50 ul cho spacer 1.5 mm còn được, quá là tràn ra ngay. Mong có dịp sẽ được học hỏi bác.
- Tùy mẫu bạn load. Nếu là protein tinh sạch, load 5 ug là vừa. Nếu bạn load cell lysate, có thể kiểm tra bằng Bradford assay. Thường mình nhìn vào pellet rồi đoán lượng SDS buffer (do có kiểm chứng bằng beta actin).
- Tổng thể tích cho 1 giếng tùy thuộc comb bạn dùng. Nếu 1.5 mm thì load 40-45...
Đối với 1st antibody, để 4 độ C và overnight là tốt nhất; 2nd antibody thì do chỉ ủ 1h nên bạn có thể để ở RT hay 4 độ C đều được. Dù sao mình thích ủ 4 độ C hơn (do lab mình có phòng lạnh và shaker).
Mình đưa thông số Western mình thường chạy để bạn tham khảo (kit Biorad):
- Sau khi chạy SDS-PAGE (50V sau khi ra running gel thì tăng 100V sẽ cho band đẹp), transfer.
- Chạy 1h30 tới 2h, 250 mA. Thường mình check mẫu 30 kDa đến 150 kDa đều ổn với thông số này.
* Có một điều lưu ý là cách...
-Thật ra nói skim milk rẻ hơn nên được ưa chuộng hơn thì không chính xác. Có nhiều kháng thể phù hợp với BSA hơn là skim milk nên dù mắc mình cũng phải dùng BSA. Khi bạn dùng skim milk cho kết quả không đẹp thì nên chuyển sang BSA để so sánh ngay.
-Thời gian cho blocking thường khoảng 1h-2h, RT...
Mình đang cần tìm thông tin về các hội nghị Cell biology, Biochemistry, Immunology nổi tiếng sắp diễn ra. Mong các bạn có kinh nghiệm về các hội nghị này tư vấn dùm mình. Xin cảm ơn nhiều.
This site uses cookies to help personalise content, tailor your experience and to keep you logged in if you register.
By continuing to use this site, you are consenting to our use of cookies.