Cho em hỏi làm thế nào để biết được đoạn gen của mình (sản phẩm PCR) đã được cắt rồi. Liệu có trường hợp enzyme không thể cắt được không, ví dụ enzyme bị hỏng hoặc đoạn mồi thiết kế không phù hợp?
Bài báo trên nói chính xác rồi, cùng vùng bao giờ về mặt di truyền cũng có nhiều điểm giống nhau hơn, và do đó dễ tạo ra tính trạng lặn. Và khác vùng còn tạo ra các con thông minh kiểu "Ưu thế lai". Tuy nhiên nếu bạn thực sự thích cô ấy và cả hai bạn đều thông minh thì cũng không vấn đề lắm:)
Clony-PCR gặp phải vấn đề có thể trong mẫu mình lấy từ khuẩn lạc vẫn chứa gene mà mình đem ligation phải không ạ? Như vậy rất có thể mình PCR cái gene đó chứ không phải PCR plasmid.
Đúng là tách plasmid cổ điển thì rất mệt. Em mới chỉ làm hai lần, mỗi lần 10 cái mà đã mất kiên nhẫn, cho luôn hai cái đĩa petri chi chít khuẩn lạc vào thanh trùng rồi, giờ lại thấy tiếc. Nhưng vẫn phải dùng kiểu cổ điển, với cái pipet đơn thôi. Em sẽ hỏi ý kiến thầy hướng dẫn về minipreps và...
one-step miniprep của anh là như thế này đúng không:
+ lấy khoảng 400 ul dịch nuôi
+ ly tâm 2 phút top-speed thu tế bào
+ Cho 20 ul PCI và 40 ul 6xloading buffer vào
+ Vortex 1 phút
+ Ly tâm 10 phút
+ Hút 10 ul dịch nổi đem điện di để quan sát nồng độ plasmid của bạn.
Mục đích theo em hiểu là...
Cần phải nói rõ hơn là em đang tạo plasmid tái tổ hợp chứ không phải tách một cái gene đã được chèn vào một plasmid có sẵn, vì vậy đang check sản phẩm. Em đang muốn biết cái đoạn 2,5 kb kia là cái gì, ở đâu ra.
Muốn hỏi thêm các anh chị một vấn đề nữa, khi tách dòng mà sử dụng enzyme cắt...
Viết bài trả lời để khẳng định nguyên nhân là do không khử trùng hóa chất. Cacl2 và glycerol đã được bỏ vào nồi hấp thanh trùng và sau đó không còn hiện tượng tế bào khả biến bị nhiêm nữa. Cảm ơn bác Hưng, Trường và bác Lương nhé:)
Em cũng gặp trường hợp này mà chưa giải thích được. Anh chị nào có kinh nghiệm vào giúp đỡ nhé:)
1. Plasmid sau khi biến nạp, đem cắt bằng hai enzyme đã dùng để cắt và nối gen, thì thu được đoạn 2,5 kb văng ra thay vì 1,1kb là kích thước gene chèn vào.
2. Một vấn đề nữa, ở một...
Cơ bản là mỗi sinh vật cấu tạo đã như thế, muốn thay đổi ổ khóa trừ khi đột biến gen, cải tạo gen, quá mạo hiểm và tốn kém để phòng rắn cắn cho mỗi người :)
Lọc khử trùng là thế nào ạ, ptn chỉ có máy hấp thanh trùng 121 độ thôi. Glycerol khi pha hóa chất trộn lẫn với Cacl2 luôn nên không dùng hai biện pháp khử trùng khác nhau được, liệu em bỏ tất vào hấp thanh trùng được không ạ.
Tế bào khả biến phòng em làm đi làm lại ba lần nay đều bị nhiễm. Test trên ampicilin mọc tứ tung. Mà tất cả các khâu, đồ dùng đều khử trùng rất kỹ, không hiểu bị nhiễm từ đâu vậy? Chỉ có hóa chất: Cacl2, glycol và kháng sinh sau khi pha là không đem khử trùng thôi. Bác nào có kinh nghiệm để làm...
Bạn nói rõ hơn đi :), OD thật OD ko là gì, có phải độ hấp phụ quang của mẫu thí nghiệm và kiểm chứng không? Với cả enzyme bạn đang khảo sát là enzyme gì, hoạt hóa hay kìm hãm phản ứng, nếu nó hoạt hóa thì OD thí nghiệm sẽ lớn hơn OD mẫu kiểm chứng; còn kìm hãm thì ngược lại. Kết quả âm nghĩa là...
Cảm ơn bác nhiều. Cho em hỏi câu này nữa:)
* Điều gì quyết định protein được sản xuất ra là nội bào và ngoại bào, có phải do một protein khác điều khiển hoạt động bài tiết protein đó không.
Theo em thấy thì các enzyme thủy phân thường được tiết ngoại bào, do đó người ta gắn gen biểu...
Mình không biết rõ cơ chế kháng độc của nó nhưng chắc chắn không phải kháng thể rồi vì hệ miễn dịch không cho phép tồn tại dòng lympho sinh ra kháng thể chống lại kháng nguyên bản thân (chất độc của con rắn đó), vì trong quá trình phát triển ở giai đoạn sớm tại tuyến ức các dòng này bị đại thực...
Baccilus sp nghĩa là Bacillus species phải không bạn?
Tớ nghĩ là phân lập nó cũng theo các phương pháp phân lập chung thôi.
Để tách nó ra từ một hỗn hợp canh trường nuôi cấy đơn giản thì có thể dùng phương pháp pha loãng rồi cấy zích zắc trên mặt thạch, nếu cần nhanh và chính xác hơn thì...
Vẫn đề ở chỗ hồng cầu chỉ là chất vận chuyển, nghĩa là vừa phải nhận vừa phải nhả O2 đúng lúc đúng nơi, chứ không chỉ có nhận mới là tốt:)
Hiệu quả vận chuyển Oxi được tính bởi hiệu xuất nhận oxi phổi và nhả ra ở các mô (mao mạch).
Khi lên núi cao, không khí loãng, cần hấp thu lượng oxi lớn ở...
This site uses cookies to help personalise content, tailor your experience and to keep you logged in if you register.
By continuing to use this site, you are consenting to our use of cookies.