Xin mọi người giúp đỡ

thanhmakysi

New member
#1
EM chào các anh chị

hiện em đang làm luận văn về sinh học phân tử, cụ thể là SSR trên đậu xanh

EM trích DNA đậu xanh theo quy trinh của Rogers và Bendich (1988)

Sau đó em chạy PCR với mồi SSR ở Ta =55 độ C (Tm của primer là 54.5 và 55)
Tuy nhiên khi điên di ở agarose 2% thì không cho kết quả ( có mỗi giếng em bỏ ruler là có sản phẩm)

Qua nhiều lần thao tác em thấy được

thứ 1: thao tác - không sai được, em làm, em nhờ ông anh làm bên sinh học phân tử làm tiếp, từ đầu đến cuối ông anh có tay nghề làm

thứ 2: hóa chất pcr -lấy của ông anh, ông anh chạy mẫu của ổng ra nên cũng không phải do hóa chất

thứ 3: nhiệt độ bắt cặp và quy trình- em sử dụng nhiệt độ bắt cặp và quy trình của người đi trước và test ở 3 mức nhiệt độ là 53,54,55 ( Primer của em có Tm là 54.5 va 55) nên em nghĩ cũng không sai ở bước này

thứ 4: DNA - DNA em trích không phải là tốt lắm nhưng cho 1 vạch sáng khá rõ khi điện di với gel 0.8% ( đứa bạn em trích DNA còn tệ hơn nhưng vẫn ra) , em trích 2 lần nhưng vẫn vậy

thứ 5: primer - hiện tại primer em sử dụng được để trong tủ ủ -20 độ C từ năm 2011 ( luận văn mới nhất làm năm 2011 với các primer đó) - em không biết 4 năm rồi còn sử dụng được không

Nay em mạn phép hỏi mọi người em sai sót ở bước nào và primer 4 năm còn sử dụng được hay không vì ông thầy cứ la hoài mà em giảithích lại không nghe

EM xin cảm ơn mọi người
 

vienlua

Member
EM chào các anh chị

hiện em đang làm luận văn về sinh học phân tử, cụ thể là SSR trên đậu xanh

EM trích DNA đậu xanh theo quy trinh của Rogers và Bendich (1988)

Sau đó em chạy PCR với mồi SSR ở Ta =55 độ C (Tm của primer là 54.5 và 55)
Tuy nhiên khi điên di ở agarose 2% thì không cho kết quả ( có mỗi giếng em bỏ ruler là có sản phẩm)

Qua nhiều lần thao tác em thấy được

thứ 1: thao tác - không sai được, em làm, em nhờ ông anh làm bên sinh học phân tử làm tiếp, từ đầu đến cuối ông anh có tay nghề làm

thứ 2: hóa chất pcr -lấy của ông anh, ông anh chạy mẫu của ổng ra nên cũng không phải do hóa chất

thứ 3: nhiệt độ bắt cặp và quy trình- em sử dụng nhiệt độ bắt cặp và quy trình của người đi trước và test ở 3 mức nhiệt độ là 53,54,55 ( Primer của em có Tm là 54.5 va 55) nên em nghĩ cũng không sai ở bước này

thứ 4: DNA - DNA em trích không phải là tốt lắm nhưng cho 1 vạch sáng khá rõ khi điện di với gel 0.8% ( đứa bạn em trích DNA còn tệ hơn nhưng vẫn ra) , em trích 2 lần nhưng vẫn vậy

thứ 5: primer - hiện tại primer em sử dụng được để trong tủ ủ -20 độ C từ năm 2011 ( luận văn mới nhất làm năm 2011 với các primer đó) - em không biết 4 năm rồi còn sử dụng được không

Nay em mạn phép hỏi mọi người em sai sót ở bước nào và primer 4 năm còn sử dụng được hay không vì ông thầy cứ la hoài mà em giảithích lại không nghe

EM xin cảm ơn mọi người

Em bao khong co buoc nao sai, toan dung.
Primer de -20 trong 4 nam thi khong sao dau.
Em muon biet sai thi phai up cai protocol len moi biet duoc chu.
noi the thi ai kiem tra duoc
 

thanhmakysi

New member
Dạ em cảm ơn, đây là quy trình em chay, em xin anh. chị xem dùm em

Thành phần 1 phản ứng
Nước cất 2 lần 12,6 μl
Buffer 2,5 μl (10x)
dNTPs 2 μl (10mM)
Primer F 1μl (10pmol)
Primer R 1μl(10pmol)
PVP 1,5 ul (1%)
Taq polymerase 0,4 μl (5O/ul)
DNA 4 μl (10ng/ul)
Tổng 25μl


Chu kỳ
94 độ C 3 phút
94 độ C 30 s
54 độ C 45 s ( mồi F 54 độ C và mồi R 54,5 độ C)
72 độ C 1 phút
72 độ C 10 phút
30 chu kỳ
 
Last edited:

Facebook

Top