What's new

xin giúp đỡ

thanhmakysi

New member
#1
EM chào các anh chị
hiện em đang làm luận văn về sinh học phân tử, cụ thể là SSR trên đậu xanh
EM trích DNA đậu xanh theo quy trinh của Rogers và Bendich (1988)
Sau đó em chạy PCR với mồi SSR ở Ta =55 độ C (Tm của primer là 54.5 và 55)
Tuy nhiên khi điên di ở agarose 2% thì không cho kết quả ( có mỗi giếng em bỏ ruler là có sản phẩm)
Qua nhiều lần thao tác em thấy được
thứ 1: thao tác - không sai được, em làm, em nhờ ông anh làm bên sinh học phân tử làm tiếp, từ đầu đến cuối ông anh có tay nghề làm
thứ 2: hóa chất pcr -lấy của ông anh, ông anh chạy mẫu của ổng ra nên cũng không phải do hóa chất
thứ 3: nhiệt độ bắt cặp và quy trình- em sử dụng nhiệt độ bắt cặp và quy trình của người đi trước và test ở 3 mức nhiệt độ là 53,54,55 ( Primer của em có Tm là 54.5 va 55) nên em nghĩ cũng không sai ở bước này
thứ 4: DNA - DNA em trích không phải là tốt lắm nhưng cho 1 vạch sáng khá rõ khi điện di với gel 0.8% ( đứa bạn em trích DNA còn tệ hơn nhưng vẫn ra) , em trích 2 lần nhưng vẫn vậy
thứ 5: primer - hiện tại primer em sử dụng được để trong tủ ủ -20 độ C từ năm 2011 ( luận văn mới nhất làm năm 2011 với các primer đó) - em không biết 4 năm rồi còn sử dụng được không
Nay em mạn phép hỏi mọi người em sai sót ở bước nào và primer 4 năm còn sử dụng được hay không

EM xin cảm ơn mọi người
 

ti_to123

Member
EM chào các anh chị
hiện em đang làm luận văn về sinh học phân tử, cụ thể là SSR trên đậu xanh
EM trích DNA đậu xanh theo quy trinh của Rogers và Bendich (1988)
Sau đó em chạy PCR với mồi SSR ở Ta =55 độ C (Tm của primer là 54.5 và 55)
Tuy nhiên khi điên di ở agarose 2% thì không cho kết quả ( có mỗi giếng em bỏ ruler là có sản phẩm)
Qua nhiều lần thao tác em thấy được
thứ 1: thao tác - không sai được, em làm, em nhờ ông anh làm bên sinh học phân tử làm tiếp, từ đầu đến cuối ông anh có tay nghề làm
thứ 2: hóa chất pcr -lấy của ông anh, ông anh chạy mẫu của ổng ra nên cũng không phải do hóa chất
thứ 3: nhiệt độ bắt cặp và quy trình- em sử dụng nhiệt độ bắt cặp và quy trình của người đi trước và test ở 3 mức nhiệt độ là 53,54,55 ( Primer của em có Tm là 54.5 va 55) nên em nghĩ cũng không sai ở bước này
thứ 4: DNA - DNA em trích không phải là tốt lắm nhưng cho 1 vạch sáng khá rõ khi điện di với gel 0.8% ( đứa bạn em trích DNA còn tệ hơn nhưng vẫn ra) , em trích 2 lần nhưng vẫn vậy
thứ 5: primer - hiện tại primer em sử dụng được để trong tủ ủ -20 độ C từ năm 2011 ( luận văn mới nhất làm năm 2011 với các primer đó) - em không biết 4 năm rồi còn sử dụng được không
Nay em mạn phép hỏi mọi người em sai sót ở bước nào và primer 4 năm còn sử dụng được hay không

EM xin cảm ơn mọi người
Thấy sao ns vậy, các bác cứ gách đá mải thoái
- về mồi, đằng ấy nên xem hạn sử dụng đi kèm sản phẩm
- ta thường tm-5, đằng ấy thử để 50 xem thế nào
 

Anh Bùi

Member
Chuyên ngành của mình khi học trong trường Đại học không phải là SHPT nên mình không giúp gì được bạn vì cái này mình khá kém nhưng mình sẽ hỏi bạn của mình giúp bạn để có câu trả lời. (Bạn mình đang làm nghiên cứu sinh ở bộ môn Sinh Y trường ĐH KHTN Hà Nội - Mình nghĩ chắc bạn ấy biết, hj).
 

Hien Do

Member
thanhmakysi bạn nên quan tâm tới mồi trong phản ứng trên, nếu là mồi gốc thì chắc không sao đâu, hồi xưa t cũng đã làm PCR sử dụng mồi để khoảng 4 năm đấy nhưng vẫn ok. Còn mồi mà đã pha loãng ra rồi thì kém hơn. Bạn có thể sử dụng nguyên bộ hóa chất mà bạn đã làm sau đó thay khuôn với primer xem có phải do primer không.

Chúc bạn sớm giải quyết được thắc mắc.
 

Facebook

Top