What's new

Tại sao trong PCR người ta không gắn mồi vào đầu 3'?

#1
Các bác cho em hỏi tí. Tại sao trong PCR người ta không thiết kế mồi gắn vào đầu 3'? Ở trong cơ thể sống thì có promoter nên phải tổng hợp theo chiều 5'-3' còn trong PCR đâu có promoter nên tổng hợp theo chiều nào cũng được chứ.
 

voh5

Member
Em đoán chắc phải chờ tới khi nào người ta tìm ra enzyme DNA polymerase có khả năng tổng hợp ADN theo chiều 3' - 5', mà lại còn phải tối ưu hơn, giá rẻ hơn các loại Polymerase bây giờ thì chắc sẽ gắn mồi vào đầu 3' thôi bác ah!

Cơ mà, vẫn chẳng hiểu sao lại phải thắc mắc câu này??? Tổng hợp nhân tạo như PCR đều dựa trên nguyên lý và nguyên liệu của Sinh tổng hợp tự nhiên thôi mà anh chị em nhỉ???
 

Ho Huu Tho

Member
Các bác cho em hỏi tí. Tại sao trong PCR người ta không thiết kế mồi gắn vào đầu 3'? Ở trong cơ thể sống thì có promoter nên phải tổng hợp theo chiều 5'-3' còn trong PCR đâu có promoter nên tổng hợp theo chiều nào cũng được chứ.
Bạn xem lại phần in đậm, mình nghe thấy hơi lạ, không biết có đúng không nhỉ?
 

hmtri

New member
Ở trong cơ thể sống thì có promoter nên phải tổng hợp theo chiều 5'-3'
câu này đúng rồi nhưng phải nói thêm là chiều 5'-3' ở mạch mới
 

Ho Huu Tho

Member
Ở trong cơ thể sống thì có promoter nên phải tổng hợp theo chiều 5'-3'
câu này đúng rồi nhưng phải nói thêm là chiều 5'-3' ở mạch mới
Vậy cho mình hỏi không có promoter thì ADN có được nhân đôi không?(y)
 
Phải tổng hợp theo chiều 5'-3' là do hoạt tính của enzyme polymerase nó thế, enzyme không tổng hợp được theo chiều 3'-5'. Nếu tìm được enzyme tổng hợp theo chiều 3'-5' thì có thể thiết kế mồi ngược với bây giờ.
 
Thế ra là người ta chưa tìm thấy enzyme tổng hợp DNA theo chiều 3'-5' à. Nhưng tại sao enzyme DNA polymerase lại chỉ có hoạt tính tổng hợp theo chiều 5'-3' mà không thể tổng hợp ngược lại? Còn ý của em trong có hay không có promoter là khác nhau. Ở trong cơ thể thì mạch bổ sung với mạch gốc tổng hợp theo chiều 5'-3' không liên tục theo từng đoạn okazaki.Còn trong PCR không có promoter nên mạch này tổng hợp liên tục. Ban đầu em cứ tưởng là promoter quyết định hướng tổng hợp 5'-3'. Promoter chi nằm trước gene thôi, còn nằm trong gene và sau gene là các trình tự điều hoà xa chẳng hạn như cấu trúc kẹp tóc...Các bác thấy không đúng chỗ nào thì sửa cho em với.
 
Nhưng tại sao enzyme DNA polymerase lại chỉ có hoạt tính tổng hợp theo chiều 5'-3' mà không thể tổng hợp ngược lại?
Trời sinh ra thế.
Còn ý của em trong có hay không có promoter là khác nhau. Ở trong cơ thể thì mạch bổ sung với mạch gốc tổng hợp theo chiều 5'-3' không liên tục theo từng đoạn okazaki.Còn trong PCR không có promoter nên mạch này tổng hợp liên tục.
Không hiểu bạn muốn nói gì???
Promoter chi nằm trước gene thôi,
Mình nhớ trong Gene VIII có nói promoter có thể nằm trước, trong và sau gene.
 
thế ra promoter không liên quan gì đến quá trình nhân bản DNA. Cho em hỏi các bác cái gì làm cho quá trình tổng hợp DNA theo từng đoạn okazaki trên sợi chậm? Có phải là trong PCR quá trình này được điều khiển bởi nhiệt độ và taqDNA polymerase nên được tổng hợp liên tục, còn trong cơ thể thì quá trình này được thực hiện thông qua sự hoạy động của rất nhiều enzyme và do cơ chế sửa sai (giảm thiểu sai sót) nên mới tông hợp theo từng đoạn okazaki rồi nối chúng lại với nhau?
 
À, các bác cho em hỏi thêm khi giải trình tự bộ genome người thì người ta làm thế nào để phân lập ra từng NST để giải trình tự (không thể quan sát trên kính hiển vi rồi phân lập cơ học được)?
 

tuaa11

New member
đầu 3 phẩy có OH thì enzim mới kéo được mạch ra. Điều này được kiểm chứng bằng cách là các đoạn okazaki được tạo ra cần có enzin nối ligazase riêng
 

lovekieu

Member
Các bác cho em hỏi tí. Tại sao trong PCR người ta không thiết kế mồi gắn vào đầu 3'? Ở trong cơ thể sống thì có promoter nên phải tổng hợp theo chiều 5'-3' còn trong PCR đâu có promoter nên tổng hợp theo chiều nào cũng được chứ.
Bây giờ người ta đã có tag mới để cho tổng hợp theo chiều 3'-5' rồi bạn ạ.
 
Thế ra là người ta chưa tìm thấy enzyme tổng hợp DNA theo chiều 3'-5' à. Nhưng tại sao enzyme DNA polymerase lại chỉ có hoạt tính tổng hợp theo chiều 5'-3' mà không thể tổng hợp ngược lại? Còn ý của em trong có hay không có promoter là khác nhau. Ở trong cơ thể thì mạch bổ sung với mạch gốc tổng hợp theo chiều 5'-3' không liên tục theo từng đoạn okazaki.Còn trong PCR không có promoter nên mạch này tổng hợp liên tục. Ban đầu em cứ tưởng là promoter quyết định hướng tổng hợp 5'-3'. Promoter chi nằm trước gene thôi, còn nằm trong gene và sau gene là các trình tự điều hoà xa chẳng hạn như cấu trúc kẹp tóc...Các bác thấy không đúng chỗ nào thì sửa cho em với.
Đầu 3' có nhóm -OH tự do (3'-OH), trong tế bào cũng như PCR đều sử dụng enzyme Polymerase (E.P) để tổng hợp DNA, khi hoạt động, E.P gắn các base mới vào đầu 3' theo nguyên tắc 3' (của mồi) gắn với gốc P (của base mới) rồi lại gắn với OH của base tiếp theo.... Nghĩa là không có đầu 3'-OH thì không thể gắn được các base mới. Chính vì vậy phản ứng luôn luôn theo chiều 5'-3', nơi mà có gốc OH tự do chứ không liên quan gì đến promotor cả
 
thế ra promoter không liên quan gì đến quá trình nhân bản DNA. Cho em hỏi các bác cái gì làm cho quá trình tổng hợp DNA theo từng đoạn okazaki trên sợi chậm? Có phải là trong PCR quá trình này được điều khiển bởi nhiệt độ và taqDNA polymerase nên được tổng hợp liên tục, còn trong cơ thể thì quá trình này được thực hiện thông qua sự hoạy động của rất nhiều enzyme và do cơ chế sửa sai (giảm thiểu sai sót) nên mới tông hợp theo từng đoạn okazaki rồi nối chúng lại với nhau?
Em cần đọc kỹ lại kỹ thuật PCR nhé, Phản ứng PCR dùng 2 mồi, DNA khuôn là sợi kép, khi biến tính thì sẽ tách thành 2 sợi đơn, mỗi sợi đều có đầu 5' và 3'. Cặp mồi dùng trong PCR được thiết kế dựa trên một số base ở đầu 5' của mỗi mạch đơn. Khi DNA tách ra thì mồi ghép bổ sung vào đầu 5' của mỗi mạch, sau đó phản ứng kéo dài xấy ra đúng theo chiều 5'-3'. Trong tế bào thì khác, enzyme sẽ không tách sợi kép như kiểu PCR mà sẽ tạo ra các điểm sao chép, trên mỗi sợi đơn sẽ tổng hợp DNA mới theo cả hai hướng, hướng 5'-3' thì ok, còn hướng ngược lại thì phải có các đoạn okazaki làm mồi. Ở sợi đơn đối diện cũng vậy
 
Thế ra là người ta chưa tìm thấy enzyme tổng hợp DNA theo chiều 3'-5' à. Nhưng tại sao enzyme DNA polymerase lại chỉ có hoạt tính tổng hợp theo chiều 5'-3' mà không thể tổng hợp ngược lại? Còn ý của em trong có hay không có promoter là khác nhau. Ở trong cơ thể thì mạch bổ sung với mạch gốc tổng hợp theo chiều 5'-3' không liên tục theo từng đoạn okazaki.Còn trong PCR không có promoter nên mạch này tổng hợp liên tục. Ban đầu em cứ tưởng là promoter quyết định hướng tổng hợp 5'-3'. Promoter chi nằm trước gene thôi, còn nằm trong gene và sau gene là các trình tự điều hoà xa chẳng hạn như cấu trúc kẹp tóc...Các bác thấy không đúng chỗ nào thì sửa cho em với.
Theo chiều 5-3' còn do vấn đề năng lượng ATP nữa, không có năng lượng thì enzyme không chịu làm việc, khi mang một ATP cao năng đến để gắn vào mồi thì 2P bị đứt, giải phóng năng lượng, base chỉ còn 1P, P này sẽ tạo liên kết photphodieste với 3'-OH, nếu OH mà tạo ra năng lượng được thì biết đâu có enzyme 3'-5' :cry:
 

Tuevu94

Member
DNA Pol không có khả năng khởi đầu sao chép DNA! vì thế nó cần 1 đoạn mồi (invivo đoạn mồi là 1 đoạn RNA) do RNA Pol tổng hợp!

Nucleotid đc photphoril hóa ở đầu 5' (NTP) thành dạng hoạt hóa và gắn vào đầu 3' của Nu trước đó giải phóng 2 nhóm photphat nên ADN pol chỉ có khả năng kéo dài mạch DNA theo chiều 5'=>3'

theo mình biết thì PCR cũng cần có đoạn mồi bổ sung vào trước đó, chắc chắn là bổ sung 2 đoạn mồi vào 2 đầu 3'
 

Facebook

Top