Realtime PCR: Hỏi đáp

Người làm PCR ko là cán bộ nghiên cứu thì là ai ? Hay là thuê cửu vạn ở ngoài vào làm ???


Mình chưa làm realtime PCR lần nào nên chỉ có ý kiến tý tẹo này. Bây giờ ở Việt nam cũng như một số nước khác người ta đã dùng PCR để chẩn đoán bệnh (ví dụ bệnh của tôm) và những người thao tác này không hẳn là cán bộ nghiên cứu, họ có thể là bất kỳ ai, mua cái máy về, mua cái KIT về, rồi cùng lắm tham gia lớp tập huấn dăm bữa rồi họ tự chạy lấy!
 

Dương Văn Cường

Administrator
1. Người làm PCR trong trường hợp ứng dụng ngoài thực tế có thể là các kỹ thuật viên trong bệnh viện, một sinh viên trường Y đi thực tập ...

2.
Kết luận dựa trên MC chưa hẳn đã là chính xác tuyệt đối
Chẳng có gì tuyệt đối, kể cả giải trình tự. Ý tôi nói kết luận dựa trên MC có độ chính xác cao hơn nhiều so với kết luận dựa trên sự có mặt hay không của sản phẩm PCR.


Cậu viết câu này là sai cơ bản, còn sai ra sao tự nghĩ lại nhé:
- vì MC chỉ báo có hay không có sp, tập hợp các đoạn đó nó có Tm khoảng bao nhiêu

Đây nữa:
Ở bước Mcurve này sẽ thấy độ đổ dốc của amplicon đột biến và không đột biến khác nhau. Khác bi nhiêu là tùy đoạn mất dài hay ngắn. Nhưng nói chung dưới 10 nu thì đừng hi vọng.
Một ví dụ là bài báo tôi đưa cho cậu đọc người ta phát hiện được đột biến mất 9 nucleotides vì melting peak của 2 sản phẩm khác nhau tới 5 độ C.


Ai bảo agarose không kết luận được homo hay hetero
Tôi chưa đọc được tài liệu nào về việc này và quả thực hơi sốc khi biết thông tin này. Nếu có thể cậu nói giùm nguyên lý cơ bản.

SYBR GREEN I giá bi nhiêu mà rẻ, toàn nói bậy ! Cho biểu giá tính trên đơn vị pứ PCR đơn coi !
Cậu có quyền không tin, nhưng kô được phép bảo tôi nói bậy trước khi tôi chứng minh cho cậu là tôi nói đúng.

Trao đổi với cậu thật khó chịu.
 

Dương Văn Cường

Administrator
Minh post bài trong chủ đề này anh mới nhớ.

Thực tế, chúng tôi đã pha chế SYBR Green I và chạy thử thành công với các assay SYBR Green I based. Kết quả chẳng kém gì dùng KIT.

Xin khẳng định lại SYBR Green I không những không đắt mà còn rẻ tới mức có thể coi như không tính đến chi phí SYBR Green khi làm phản ứng.
 

qtrung

New member
các bác làm ơn cho em hỏi ngu một tý. Một hệ thống định dạng ADN ( có dùng realtime PCR )gồm những thiết bị gì, khoảng tiền các rgiết bị và co thể mua ở đâu ở việt nam. em đa tạ các bác nhiều :???:
 

viet23ht

Member
Thiết bị "định dạng ADN"

Tôi không hiểu rõ hết ý của bạn hỏi, nếu làm mục đích cá nhân thì khác, cho Công ty thì khác, cứ tìm máy real time trên mạng, tìm nhà cung cấp ở Việt Nam, gửi họ yêu cầu, thế là bạn có cấu hình.
Tôi có thể cho bạn 4 địa chỉ mua được nhưng sợ lại nghĩ tôi quảng cáo.
Bạn cứ hỏi họ trước đi đã, sau đó có gì cần chi tiết thì liên hệ với tôi qua mail.
Tôi có chút kinh nghiệm vì đã setup vài phòng TN về mảng này.
 
Realtime PCR dịch là PCR định lượng (trong sách nói thế), các anh các chị dùng tiếng Việt cho dễ hiểu :D
không nên dùng tiêng Việt hết vì có những thiết bị, phương pháp, thuật ngữ dich sang tieng Việt không chuẩn được, hơn nữa chúng ta nên làm quen với cá thuật ngữ tiếng anh rất tốt cho sau này nói chung là có nhiều cái lợi lắm nói không hết được...


các bác làm ơn cho em hỏi ngu một tý. Một hệ thống định dạng ADN ( có dùng realtime PCR )gồm những thiết bị gì, khoảng tiền các rgiết bị và co thể mua ở đâu ở việt nam. em đa tạ các bác nhiều :???:
mình nghị không phải là hỏi ngu ngu đau, vì không phải chỉ riêng bạn không biết , mình đã lamg voi Rt PCR mấy lần nhưng mình cũng không biết hết nó gồm có những gi, theo quan sat của mình thì tuy vào của các hãng và các đời khác nhau và cáu hình của mấy thi có kiểu dáng mấy khac nhau . thường thì mình thấy may RTPCR và kết nói với một máy tình là
nhiều khi lam PCR chỉ là một bước trong một bài thí nghiệm thì người ta không nhất thiết phải tìm hiểu mấy đó làm cấu tạo thế nào và thực hiện như thế nào. ở nước ngoài hầu như những khâu như thế lại có kỹ thuật vien người ta làm, mình chỉ làm mẫu rồi mỗi khâu cụ thể lại có ky thuật viên, nên nhiều khi sv cũng chỉ được giới thiệu sơ lược qua vè máy móc.:twisted:
 
Bạn cứ hỏi họ trước đi đã, sau đó có gì cần chi tiết thì liên hệ với tôi qua mail.
Tôi có chút kinh nghiệm vì đã setup vài phòng TN về mảng này.
Xin hỏi chú viet 23t mấy câu rất chi là chân thành rằng là:

1. Chú setup xong vài phòng TN về mảng này thì sau đó phòng TN đó có đi vào hoạt động được không?

2. Nếu hoạt động được thì phòng TN đó vẫn hoạt động trên tinh thần 'thiết bị phòng thí nghiệm, hóa chất độc quyền chứ'?

3. Chú có thể liệt kê cho anh em biết vài (tạm hiểu là lớn hơn 2) phòng TN mà chú đã setup cho họ được không?

Cám ơn chú thật nhiều.
 

qtrung

New member
trong phòng Lab đúng là có nhiều thiết bị thật. Khi còn mài đũng quần trên ghế nhà trường có nằm mơ cũng không hiểu nổi đó là những thiết bị gì.
Hic bây giờ ra trường thấy nó sao mà nhiều quá trời vậy. mỗi tb có chức năng riêng. Mỗi hãng lại có ưu nhược điểm quá trời là nhiều thứ cần học. :hum: còn các công nghệ mới nữa ôi trời là nhiều. :???:các bác có bí quyết gì xin chỉ giáo cho em với ạ
 

viet23ht

Member
thiểt bị real time PCR

Chú trung đã hỏi anh minh chưa, thật ra có một địa chỉ nữa, nhưng chỗ này thì giới thiệu sau.
Chắc là mục đích của chú là chẩn đoán bệnh chứ gì HBV, HIV ... phải không.
Có hai cách cho chú lựa chọn:
1. Chọn cấu hình máy RT ở Việt nam, thường là có kèm 1 máy xách tay. Yêu cầu nhà cung cấp cho tham quan dòng máy đó đã chạy ở lap nào, tốt nhất theo mục đích của bạn.
2. Nếu là dùng chẩn đoán bệnh HIV, HBV thì có thể thuê tư vấn, từ thiết kế phòng thí nghiệm, mua trang thiết bị ở mức tối thiểu theo yêu cầu của xếp em. Bọn anh có thể giúp vì anh cũng tham gia setup nhiều phòng thí nghiệm, thậm chí là chịu trách nhiệm về mặt chuyên môn để cho nó chạy được.
Chỗ mà anh học về thí nghiệm hoàn toàn làm được điều này, họ chạy HBV, HIV từ 2004 cơ, nhiều kinh nghiệm lắm.
Chú ý, ở nước ngoài thì kỹ thuật viên chạy máy, còn ở Việt nam thì từ những trang thiết bị nhỏ nhất người làm cũng phải tự sửa, không biết cũng phải "đè" nó ra mà sửa. Những cái này là kinh nghiệm xương máu nên chỉ có thể "bán" chứ không nói xuông được.
 

lê biên

New member
Cho mình hỏi là: có thể thay thế Ethidium bromide bằng Sybr green I không vậy?
Mình chân thành cảm ơn
 

mabu9669

Member
mình nghị không phải là hỏi ngu ngu đau, vì không phải chỉ riêng bạn không biết , mình đã lamg voi Rt PCR mấy lần nhưng mình cũng không biết hết nó gồm có những gi, theo quan sat của mình thì tuy vào của các hãng và các đời khác nhau và cáu hình của mấy thi có kiểu dáng mấy khac nhau . thường thì mình thấy may RTPCR và kết nói với một máy tình là
Anh ơi. English gì thì cũng phải ghi Real time chứ RT là Reverse Transcript đấy. Em bị cốc đầu mấy lần rồi.
Chú ý, ở nước ngoài thì kỹ thuật viên chạy máy, còn ở Việt nam thì từ những trang thiết bị nhỏ nhất người làm cũng phải tự sửa, không biết cũng phải "đè" nó ra mà sửa. Những cái này là kinh nghiệm xương máu nên chỉ có thể "bán" chứ không nói xuông được.
Em thấy cứ mày mò sửa thì từ từ khá thôi. nếu có kinh nghiệm anh chỉ giáo đàn em. Nếu bán thì qui ra thế nào bây giờ. Anh bảo cần thì e-mail mà ko ghi mail, hỏi thì kêu bán :cry:. Em thấy sao nói vậy thôi. Vì cũng chưa có cửa setup hay built 1 lab nào
 

cherry

Member
Chính xác.

Đây là câu trả lời từ Roche.


Về lý thuyết, đột biến điểm có thể được xác định bằng SBGR Green nếu nó có thể làm thay đổi nhiệt độ nóng chảy của sản phẩm ít nhất 1 độ C. Tuy nhiên, trên thực tế điều này là khôgn tưởng.

Vấn đề ở đây là sv_ngheo không phân biệt "Xác định đột biến điểm" và "Xác định đột biến". Nếu dùng SYBR GREEN có thể phát hiện được đột biến mất đoạn như trong bài báo đã viết. Việc sử dụng SYBR GREEN để làm điều này có ưu thế hơn so với sử dụng PCR thông thường như thế nào ? Liệu sv_nghèo có vui lòng nói cho mọi người rõ ? 8)
Mình dùng MC để xác định môt điểm đột biến SNP cực chính xác . Gửi bạn bài bao này để đọc tham khaỏ
 

viet23ht

Member
"Anh bảo cần thì e-mail mà ko ghi mail, hỏi thì kêu bán :cry:. ":banbo:
bó tay luôn, anh có địa chỉ mail để liên lạc mà ko tìm được thì bó tay.
Nói là bán cho nó oai thôi, chú cần thì dăm cốc bia với vài chầu cafe là có thôi mà.
Chat Trực Tuyến Send an Instant Message to viet23ht Using...

 
Thay rât tố. Mình thương dùng green I của Molecular Probes vi nó cực nhậy và không gây ưng thư
Bạn có thể cho mình biết Green I có đắt không? Dùng để nhuộm gel agarose thay Ethidium bromide như thế nào? Cần thiết bị gì để đọc kết quả? Cảm ơn bạn.
 

cherry

Member
Bạn có thể cho mình biết Green I có đắt không? Dùng để nhuộm gel agarose thay Ethidium bromide như thế nào? Cần thiết bị gì để đọc kết quả? Cảm ơn bạn.
Gia của Syber green I khoang 249 USD tube. Bạn cần co máy scan gel cho syber green. Lab mình dùng máy của Biorad
SYBER Green I DNA Stain





(0 customer reviews)

Larger image
Use this fluorescent dye to detect DNA that is more sensitive and less mutagenic than standard stains, like Ethidium Bromide (EtBr). Ideal for PCR, apoptosis, and heteroduplex analysis, the SYBER Green stain provides a great signal to noise ratio with minimal background. Detect as little as 60pg dsDNA and 1ng oligonucleotides in agarose and polyacrylamide gels with this formulation. Stain is supplied as a 10,000X concentrated solution in DMSO with ten 50ul tubes to prevent repetitive freeze thaw cycles. Lamps and UV transilluminators are required to visualize the stained DNA, but not included. Note: -20°C storage required.
 

viet23ht

Member
SG phát sáng ở λ 488 nm hoặc λ = 522 nm. bạn có thể tận dụng đèn soi gel dùng bóng UV đang phát hiện ET để dùng, nếu ở mức cao hơn thì mua máy soi gel với phần mềm gelPro
 

cherry

Member
Bạn có thể cho mình biết Green I có đắt không? Dùng để nhuộm gel agarose thay Ethidium bromide như thế nào? Cần thiết bị gì để đọc kết quả? Cảm ơn bạn.
mình có thể tặng bạn 100 Ml SR 1 đủ dùng cho khỏang 30- 50 bản gel ( độ fa la 10000 lan) agarose nếu bạn muốn và nếu bạn mình đồng ý cầm về Viêtnam hộ. Bạn có thể dùng máy UV bình thường để soi gel
 

tuxedo1987

New member
Em doc thay RT-PCR la de dinh luong nhung neu sau 1 so chu ky nhat dinh thi cac sang pham dat nguong Plateau. Vay thi dinh luong o thoi diem nao (sau bao nhieu cycle) la hop ly va chinh xac nhat? Va nguoi ta so sanh bang copy number hay Ct?
Va e thay khi danh gia dinh luong, co the do loi pipet luong DNA dua vao co the khac nhau, vay ket qua ko con chinh xac nua? Va lam cach nao de set up standard
Em do' mai ma ko danh duoc tieng Viet co dau, mong anh chi thong cam.
Thanks
 

Facebook

Top