PCR cùng quy trình nhưng kết quả khác nhau

machnha

New member
#1
Mình và bạn có chạy pcr 5 mẫu ( từ các loại cây khác nhau), sản phẩm lúc chạy 12µl thì mẫu ra sáng, cả 25 băng đều sáng rõ ( dõ mỗi mẫu mình xài 5 mồi)
Nhưng sau đó khi mình pcr tinh sạch thêm 2 lần nữa cùng một quy trình với thể tích 50µl và 25µl thì kết quá đều không có hiện băng nào.
vì mater mix mình xài là mater mix tự pha cho mỗi lần xài, lần pcr tinh sạch mình đã pha lại, và k cho kết quả,nên mình pha lại và thử thêm 2,3 lần nữa thì vẫn thấy có 1,2 băng hiện ra, dùng sản phẩm pcr cũ thì thấy băng sáng rõ bình thường. Do mình lặp đi lặp lại 3 lần, cùng 1 quy trình pcr, và dùng cả 5 mẫu, nên nói quy trình làm hay do thao tác của mình, mẫu đều không đúng.
Nhưng ống mater mix vẫn cho 1,2 băng hiện ra, dùng sản phẩm pcr cũ thì vẫn sáng. Ai có kinh nghiệm trong vấn đề này chia sẽ cho mình có thể do đâu được khộng a?
 

Mainguyen

New member
Trong trường hợp này thì bạn cần xét đến 3 vấn đề:
1. Thể tích mẫu PCR, bạn đã thử 50µl và 25µl nhưng bạn đã chạy lại thể tích 12µl như lần đầu bạn chạy chưa? Thể tích tổng số và thể tích DNA lúc chạy PCR rất quan trọng.
2. Phần lớn các kết quả PCR không như mong muốn đều do chất lượng mẫu DNA bạn dùng PCR không tốt hoặc không đồng nhất. Bạn cần kiểm tra quá trình tách chiết và thao tác tách chiết của mình, theo các anh/chị thường làm tách chiết thì tách chiết kit cho kết quả đồng nhất và chất lượng khá tốt tùy theo kit bạn chọn. Trước khi PCR bạn nên điện di để kiểm tra chất lượng mẫu DNA.
3. Một việc nữa, tuy nói là các quy trình bạn và bạn của bạn làm giống nhau 100% nhưng bạn có chắc chắn rằng cách bạn pha phản ứng, trình tự các bước chạy mẫu, loại hóa chất bạn dùng, các thiết bị liên quan bạn sử dụng,... giống nhau 100%. Bạn nên check lại nhé!
 

Facebook

Top