Cho em hỏi về Flow cytometry xíu?

Lê Duy

Member
#1
Em đang cần đếm số tế bào B của lách chuột bằng Flow cytometry. Em recommend sử dụng CD19 nhưng prof kêu ít quá, phải tìm thêm. Em tìm hoài không ra được cái gì mới chỉ có B220 nhưng cũng tương tự như CD19. Anh chị nào biết sử dụng marker nào thì chỉ cho em biết với. Em xin chân thành cảm ơn.
 
Mình chưa hiểu ý "ít" ở đây lắm, số lượng tế bào đếm được ít hay ít marker để sử dụng?

Với tư cách người làm flow (không phải chuyên gia huyết học), mình lại quan tâm đến chiến lược để đánh tan mô lách và giải phóng tế bào hơn. Bạn có thể chia sẻ được không? ^^

Về B-cell, thông thường CD19 và 20 được dùng để đếm tế bào B tổng số (total B-cells), ngoài ra còn cả đống CD38, CD138, IgM, CD27, v.v.. (cái này phải tra bảng antigen trong quá trình biệt hóa B-cell để lựa chọn panel phù hợp)

Kết quả đầu tiên khi Google:
http://www.clinimmsoc.org/teaching/slides/b_cell_development.ppt said:
Total B cells: CD19+

Total B cells: CD20+

Naive B cells: CD19+, IgD+, CD10+

Naive B cells: CD19+, IgD+, IgM+

Mature B cells: CD19+, CD20-, IgG+

Memory B cells: CD19+, CD27+, IgM+

Switched memory: CD19+, CD27+, IgM-

B1 B cells: CD19+, CD5+

HIGMII: CD19+, CD40+
Múa rìu chỉ được đến thế, chờ thợ chuyên nghiệp vào cho ý kiến ^_^
 

Philtre

New member
Tôi đang làm nghiên cứu về Miễn dịch, trên cả 2 dòng tế bào B và T. Hôm nay tình cờ đọc bài này, tôi muốn chia sẻ một chút kinh nghiệm của mình, không biết bạn có cần nó nữa hay không.

- Nếu chỉ đếm total mature B cells thì dùng CD19 hay B220 đều được cả. Nếu cần thiết thì bạn nhuộm thêm PI, DAPI hoặc 7-AAD để loại bỏ dead cells thì sẽ có kết quả chính xác hơn.

- Về phương pháp tách tế bào từ lách thì như sau:
Toàn bộ quá trình bạn phải thực hiện với môi trường nuôi cấy (2%FCS) hoặc PBS, trong đó có các bước nghiền mô lách, treat với ACK....

Nếu bạn cần chi tiết hơn thì có thể liên lạc với tôi, tôi sẽ gửi Protocol cho ban.
 

Nguyễn Xuân Hưng

Administrator
Tôi đang làm nghiên cứu về Miễn dịch, trên cả 2 dòng tế bào B và T. Hôm nay tình cờ đọc bài này, tôi muốn chia sẻ một chút kinh nghiệm của mình, không biết bạn có cần nó nữa hay không.

- Nếu chỉ đếm total mature B cells thì dùng CD19 hay B220 đều được cả. Nếu cần thiết thì bạn nhuộm thêm PI, DAPI hoặc 7-AAD để loại bỏ dead cells thì sẽ có kết quả chính xác hơn.

- Về phương pháp tách tế bào từ lách thì như sau:
Toàn bộ quá trình bạn phải thực hiện với môi trường nuôi cấy (2%FCS) hoặc PBS, trong đó có các bước nghiền mô lách, treat với ACK....

Nếu bạn cần chi tiết hơn thì có thể liên lạc với tôi, tôi sẽ gửi Protocol cho ban.
Bạn có thể cho biết bạn đang làm việc tại Việt Nam hay nước ngoài không? Sở dĩ hỏi vậy vì tôi đang quan tâm đến các nhóm ở VN nghiên cứu T and B cells.
 

Philtre

New member
Bạn có thể cho biết bạn đang làm việc tại Việt Nam hay nước ngoài không? Sở dĩ hỏi vậy vì tôi đang quan tâm đến các nhóm ở VN nghiên cứu T and B cells.
Tôi đang làm nghiên cứu tại Nhật, nhưng tôi cũng có hợp tác nghiên cứu chặt chẽ với một số nhóm nghiên cứu ở ngoài Bắc.
Nếu anh Hưng có điều gì trao đổi thì cho tôi địa chỉ mail được không, tôi sẽ liên lạc với anh.
 

Pretender

Member
- Nếu chỉ đếm total mature B cells thì dùng CD19 hay B220 đều được cả. Nếu cần thiết thì bạn nhuộm thêm PI, DAPI hoặc 7-AAD để loại bỏ dead cells thì sẽ có kết quả chính xác chban.
Cho em hỏi tại sao lại dùng B220 cho total mature B cell ạ? Có đủ specific không?
 

Philtre

New member
B220 epitope biểu hiện chủ yếu trên tế bào B từ giai đoạn sớm đến giai đoạn trưởng thành (early Pro-B to mature B cells) cho nên trong thực nghiệm người ta thường dùng marker B220 (CD45R) để xác định tỷ lệ tế bào B trong quần thể tế bào nào đó. Tất nhiên không thể tuyệt đối, nhưng đủ để đánh giá một cách chính xác vấn đề cần nghiên cứu bởi vì hiện tại không mấy ai chỉ đếm mỗi tế bào B mà thường nghiên cứu các giai đoạn phát triển hay các loại tế bào B khác nhau. Khi đó người ta dùng thêm các marker khác cùng với B220 và như vậy có thể định danh một cách chính xác loại tế bào mà mình quan tâm.

Thực tế là trong các bài báo khoa học người ta cũng dùng B220 là marker của B lymphocyte.

VD trong thí nghiệm chúng tôi dùng các marker như sau:

Naive B cells: B220, Fas (CD195), PNA, IgD
Germinal center B cells: B220, Fas, PNA
Plasma cells: CD38 và CD138
Marginal zone or Follicular B cells: B220 (orCD19) và CD21, CD23 hay IgM, IgD...
 
Ngoài B cells ra thi B220 cũng có biểu hiện trên một nhóm nhỏ của DC là plasmacytoid dendritic cells. Tuy nhiên về cơ bản thi B220 là makker cua B cells , nhưng nếu muốn chính xác tùy theo yêu cầu thì phải dùng combination của marker.
 

Facebook

Top