Cho em hỏi một vài điều về Insulin

[[S]]

Ở trường em đanh làm một đề tài về chiết tách Insulin, nhưng em không thể nào biết đc cách tính lượng Insulin tách ra đc cả insulin cả. VD như tử 3 5g tụy làm thế nào có thể biết đc bao nhiêu g Insulin đc chết tách ra???
với lại cho em hỏi, trong quá trình chiết tách Insulin từ tuyến tụy ý, có một giai đoạn là phá vỡ màng tế bào, vậy làm cách nào để mình có thể loại đi những chất bẩn trong quá trình phá vỡ màng tế bào, chỉ để lại Insulin tinh sạch thôi!!!
Anh chị nào biết có thể chỉ em đc không???? Em cám ơn lắm lắm!!!

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Protein purification là cả 1 quá trình rất dài. Quan trọng chỗ bạn làm có khả năng thiết bị đến đâu.

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Oạch, trường em là trường nào mà làm cả insulin kinh thế?

 

[[S]]

đây chỉ là đề tài thôi, nhưng mà khi em làm lên(dạng Power Point ấy), thì cô hỏi lúc phá vỡ màng tế bào, làm sao để loại bỏ hết tất cả những tạp chất do việc phá vỡ này tạo ra??? thế là em đứng luôn, cô gợi ý là chạy sắc ký, làm miễn dịch, em nghĩ mãi mà chả hiểu gì, tin tưởng mọi người ở đây em lên hỏi, không biết mọi người có biết không, chỉ em với!!! Với lại còn cái vụ tính lượng ínuuliinn thành phẩm ấy, làm sao tính đc hả các anh???
Ai biết chỉ em với, em sắp báo cáo rồi mà chả biết mô tê gì về 2 cái vụ này cả

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

Anh cũng chịu luôn. Cô em làm khó em rồi. Mấy câu này tiến sĩ cũng chịu luôn....
Các bác anh chị vào giúp em nó với.

 

[[S]]

ai chỉ em dùm đi!!! Bác Hưng, bác Lương hay anh chị nào biết thì chỉ em với

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Anh ko biết em đang học năm mấy và backgroud của em đến mức nào rồi. Anh tóm gọn lại, có gì em tự google thêm nhá.
Để tách insulin từ serum em phải ly tâm, lọc lấy dịch của nó, bỏ bã đi. Sau đó xử lý hết các lipid, carbohydrate và DNA trong mẫu bằng các enzyme tương ứng (cái này anh ko nhớ, em tự check lại nhé).
Mẫu còn lại toàn protein ko, thông thường người ta sẽ chạy 2D PAGE để xác định xem trong mẫu có những fragment protein nào và target protein nó nằm ở đâu. 2D PAGE sẽ phân tách theo pI và khối lượng phân tử.
Với Insulin là 1 protein thông dụng nên thường có kit sẵn để tinh sạch, không thì em có thể tiến hành theo quy trình sau
- Sắc ký trao đổi ion hay sắc ký ái lực (nếu em có đc antibody của nó). Anh ko rõ là nó có tinh sạch bằng sắc ký đảo pha được không vì ko biết tính kỵ nước của nó.
- Sau khi rửa cột, lấy fragment có protein đi chạy SDS-PAGE. Lấy fragment ở tầm 6000 Da đi test xem có phải có insulin trong đó không.
Định lượng nó anh nghĩ chắc có bộ kit dùng elisa.

 

[[S]]

sao thấy căng thẳng quá ta!!! Em mới học năm 2 thôi, không lẽ cô em "chơi" em đến mức này sao trời???
Ủa vậy là việc định lương Insulin là dựa vào Elisa hả anh??? Nhưng em theo những gì em biết thì phương pháp Elisa là sử dụng kháng thể để xác định HIV mà??? như vậy thì cơ chế tác động của Elisa trong cái này thì sao hả anh???

 

[Nguyễn Ngọc Lương]

úi trời. Em học trường nào mà học năm 2 đã ngang tiến sĩ nước ngoài thế. Đáng mừng cho tương lai của đất nước quá.
Trước hết em đọc sách cơ bản về SHPT đi đã: ELISA là gì, sắc ký là gì....v.v

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Nội protein quantification ko thôi cũng đủ vài quyển sách bự rồi em à, giới hạn của bài post làm sao mọi ng có thể nói hết cho em được
Đơn giản nhất là các standard assay (chắc em sẽ hay đã làm trong thí nghiệm hóa sinh): Lowry, Bradford, BCA hay Biuret.
Hơn 1 chút thì có stain bằng Fluorescent hay dùng các chất có tính phóng xạ.
Cao cấp là dùng HPLC kết hợp với đầu dò UV hay mass spec

ELISA là nguyên lý chung của các phép phân tích sử dụng enzyme gây đổi màu và antibody tương ứng với 1 kháng nguyên cần phân tích. Ko chỉ giới hạn để test HIV đâu em à.

Em mới học năm 2 thì yêu cầu của cô em sẽ nhẹ hơn, vì vậy ở đầu của bài post anh mới hỏi là ko biết em học đến đâu rồi mà.
Tinh sạch đúng nghĩa thì phải làm đến cùng. Anh nghĩ yêu cầu của cô em chỉ là làm sao loại hết tạp chất ra thôi, thu được 1 cái cục có insulin trong đó là ổn rồi.

 

[[S]]

dạ, mấy cái thí nghiệm như Lởy, Biủett thì em làm rồi, em sẽ về xem kỹ hơn!!! Vậy anh cho em hỏi điều cái này nha, phương pháp tách insulin từ tuyến tụy nói chung thì được chia ra làm nhiều bước, vậy thì làm sao để xác định là sau từng bước mình biết là có insulin trong đó hả anh??? Nếu như có insulin trong đó thì làm sao để định lương insulin là khoảng bao nhiêu hả anh???

 

[Nguyễn Duy Hưng]

Muốn biết có insulin hay ko thì phải định tính, có nhiều cách lắm. Thông dụng là dùng antibody của nó hay dùng receptor (vì nó là hormone)
Mún bít có bao nhiêu thì phải định lượng. Cái này anh đã nói sơ qua ở bài post trên rồi.

 

[[S]]

dạ, vậy em hiểu sơ sơ rồi, để em về tìm thêm tài liệu, em cám ơn anh nhe!!! Có gì em không hiểu anh chỉ em thêm nha!!!

 

[vietha86887]

muốn tìm hiểu sâu hơn về công nghệ sản xuất Bia

chào mọi người !ai có tài liệu về malt,công nghệ lên men bia,và các tài liệu liên quan chỉ em với