What's new

Cho em hỏi 1 tí về kết quả điện di proten SDS - Page

#1
Trong thí nghiệm điện di của em chạy 2 mẫu. Chạy ra 4 giếng. Cặp giếng 1-3 và 2-4 là cùng 1 mẫu nhưng khác nồng độ.
Khi đo nồng độ protein trong các mẫu thì có kết quả:
_ Giếng 1: 0,547mg/ml
_ Giếng 2: 2,619mg/ml
_ Giếng 3: 0,212mg/ml
_ Giếng 4: 0,997mg/ml
Kết quả chạy điện di của em ra giếng 1 có nhiều band khá đậm. Giếng 3 giống giếng 1 nhưng nhạt hơn. Giếng 2 chỉ có 1 band khá nhạt ở gần vạch chạy còn giếng gần như không hiện band. Điều em không hiểu ở đây là tại sao giếng 2 và giếng 4 có nồng độ protein cao hơn nhưng lại hiện band nhạt hơn so với giếng 1 và 3. Ah, trong quá trình làm, em dự đoán được mẫu 1 là một hỗn hợp enzyem còn mẫu 2 là 2 polypeptide có trọng lượng gần nhau và ở khoảng 6-7kD. Có phải vì mẫu 2 là polypeptide nên bắt màu thuốc nhuộm kém không ạh? Mong anh chị trả lời giúp em. (y)
 

Lê Duy

Member
chào bạn. Bạn có thể scan miếng gel và up hình lên cho mọi người cùng xem được không? để mọi người có thể nhìn kỹ hơn. Bạn cho mình hỏi bạn đo nồng độ protein bằng pp gì được không? độ tin cậy của phương phap này? Mẫu của bạn đã xử lý bằng sample buffer có tốt không? Lượng mẫu nạp vào các giếng có bằng nhau không và có bị tràn giếng hay không? có khi xử lý mẫu không tốt protein bị tủa lại trên giếng và không đi vào gel được. Bạn nhuộm gel bằng gì comasive hay nhuộm Ag? Còn nó là polypeptide 6-7KDa thì vẫn bắt màu thuốc nhuộm bình thường bạn ạ.
 
Mình ko rõ lắm là protein của bạn là purified (tinh lọc) hay là crude (thô), nếu mẫu 1-3 là crude còn 2-4 là purified thì 1-3 nhiều band còn 2-4 có 1 band thì cũng ko sai, với lại bạn dùng bao nhiêu protein chỗ giếng ?

Theo mình hay làm thì với purified protein ko cần nhiều, khoảng 0,5 µg là ok, còn crude thì bạn cần khoảng 50 µg. Với lại còn tùy thuộc vào phương pháp nhuộm, nếu bạn nhuộm bằng silver thì chắc chắn chỉ với số lượng rất nhỏ Protein bạn sẽ có thể thấy band, còn nhuộm bằng Coomassie thì cần nhiều protein hơn.

Cũng như bạn Lê Duy nói nếu bạn chắc mình ko làm thao tác gì sai và sau nhiều lần lập lại đều cho ra kết quả giống nhau thì bạn nên hỏi trực tiếp giáo sư hoặc người có kinh nghiệm với mẫu mà bạn đang làm.
 

Facebook

Top