What's new

Cấy chuyển mô thực vật bị chết hàng loạt

#1
mình đang gặp rắc rối to, phòng nuôi cấy mố của mình tự dưng biểu tình chết hàng loạt nè.có ai giúp mình k?
minh đang nuôi cấy mô hoa Lan.Không biết nguyên nhân gi mà khi mình cấy chuyền sang thì sau vài tuần cây bị thối và chết? 8O  :?:
 
Bạn mà cũng ko biết nguyên nhân gì thì ai mà biết được đây.Xem có phải ko tiệt trùng sạch ko?hay các điều kiện phòng nuôi ko đảm bảo(mình đã bị 1 lần ngậm ngùi vì......mất điện).Làm thí nghiệm thì phải chấp nhận rủi ro rồi.Một lần chết một lần kinh nghiệm vậy.
Hay ngồi ngắm nghía 1 tí xem có cái nào còn xanh xanh thì mang ra chuyển tiếp vậy.Nhưng có lẽ tốt nhất là làm lại thôi.
 

Cao Xuân Hiếu

Administrator
Re: vấn đề trong nuôi cấy mô?

Trịnh Ngọc Ái said:
mình đang gặp rắc rối to, phòng nuôi cấy mố của mình tự dưng biểu tình chết hàng loạt nè.có ai giúp mình k?
minh đang nuôi cấy mô hoa Lan.Không biết nguyên nhân gi mà khi mình cấy chuyền sang thì sau vài tuần cây bị thối và chết? 8O  :?:
Tôi cũng nghĩ khả năng đầu tiên là bị nhiễm nấm / khuẩn. Tẩy trùng lại toàn bộ phóng nuôi cấy mô và các dụng cụ thí nghiệm. Một khả năng khắc là vấn đề ở môi trường pha đợt mới này. Hãy pha lại môi trường và kiểm tra từng lọ hóa chất một xem có lọ nào có dấu hiệu khả nghi không (chuyển màu, đóng tủa, hết date .v.v). ?Bạn có đồng thời làm với các thí nghiệm nuôi cây mô cây khác không? vấn đề ở đây mang tính hệ thống (toàn bộ mọi thí nghiệm) hay chỉ là tần số chết cao hơn bình thường.

Chúc may mắn,
 
minh nghi khong phai la do vo trung k dat,khong phai la tan so chet cao ma tat ca k con song mot cay.
mau cay vao su vai tuan thi moi truong chuyen mau,va tu tu cay bi chet, khong cuu duoc.
minh cung nghi nguyen nhan la do hoa chat, nhung minh cung da pha lai nhieu lan the nhung no van vay.


Nhắc bạn Ái cần gõ tiếng Việt có dấu. Đề nghị sửa lại bài này.
 

Cao Xuân Hiếu

Administrator
Trịnh Ngọc Ái said:
minh nghi khong phai la do vo trung k dat,khong phai la tan so chet cao ma tat ca k con song mot cay.
mau cay vao su vai tuan thi moi truong chuyen mau,va tu tu cay bi chet, khong cuu duoc.
minh cung nghi nguyen nhan la do hoa chat, nhung minh cung da pha lai nhieu lan the nhung no van vay.
Thật là khó để làm e-doctor bắt mạch qua net thế này có thể nhiều lúc sáng kiến thành tối kiến mà ngược lại thi thoảng lại xảy ra. Tôi liệt kê 1 vài khả năng bạn xem thử:

1. Nhiễm nấm /VK: điều gì làm bạn khẳng định là vô trùng? may ra ta lại tìm được nguyên nhân từ đâu đó chăng? Bạn định kỳ bao lâu thì vô trùng phòng nuôi cấy và box cấy, màng lọc khuẩn 1 lần? vô trùng bằng cách nào?

2. Ngoài cây Lan, lab bạn có đồng thời đang nhân các cây gì khác không? nó có bị chết như vậy không? nếu không thì những gì không liên quan đến những thí nghiệm đang thành công là nguyên nhân.

3. Bạn đang cùng nhân giống cùng quy trình với những lab khác đang thành công hay không? nếu có thì bạn chạy sang lab đó cầm vài bình về cấy chuyển cây mình ra, nếu thành công thì nguyên nhân nằm trong cái bình còn không thì là những cái còn lại.

4. Kiểm tra tỉ mỉ lại pH của môi trường và các hóa chất (đệm) thành phần. Đồng thời kiểm tra lại pH meter, kiểm tra tính chính xác của cân

5. Kiểm tra từng loại hóa chất một nếu xác định nguyên nhân từ hóa chất. Nếu bạn cho biết thành phần chính được thì tốt? thay đổi những hóa chất vô định (ko kiểm soát được) như nước cốt dừa chẳng hạn?

6. Nếu mà lỗi không thể xuất phát từ những hóa chất thì có thể những cái không thể (hoặc thường xuyên) không hỏng đã có trục chặc ví dụ như cái nồi khử trùng chẳng hạn: có thể nó bị ngắt điện khi không đủ thời gian /nhiệt độ sẽ gây nhiễm nấm/vk; hoặc ngược lại nhiệt độ và thời gian cao/dài làm biến tính mất hóa chất nhạy nhiệt trong môi trường. Bộ điểu khiển chế độ nhiệt độ, chế độ ánh sáng, v.v. của phòng nuôi có bị thay đổi?

7. Cái mà không thể đối khi có thể bạn đổi kiểu tóc khác xem ?:?
 
mình nghĩ không phải là do vô trùng không đạt,không phải là tần số chết cao mà tất cả không còn sống một cây.
mẫu cấy vào sau vài tuần thì môi trường chuyển màu,và từ từ cây bị chết, không cứu được.
mình cũng nghĩ nguyên nhân là do hoá chất, nhưng mình cũng đa pha lại nhiều lần thế nhưng nó vẫn vậy.
 
có lẽ là bạn Hoàng nói đúng với tình trạng hiện giờ của mình đấy, Lan của mình sau khi cấy khoảng vài tuần thì cây bị mất diệp lục, cũng có một số bị úng.Đặc biệt là pH của môi trường đó giảm rất mạnh ( pH khoảng 3-4).
 
- giai đoạn nhân chồi : MS + 1-1.5ml/l BA + 0.5 ml/l NAA + 1.5-2g/l than hoạt tính.
- Giai đoạn nhân cây: MS+ 0.5ml/l BA + 1.5ml/l NAA + 1.5-2 g/l than hoạt tính.

Trong môi trường mà bạn đưa ra thì đơn vị các chất điều hòa sinh trưởng là ml/l, bạn cần xem lại đây là đơn vị chính xác hay chưa, vì thường thì sử dụng đơn vị là mg/l
 
Rất có thể do bị ảnh hưởng của than hoạt tính, đây là loại hóa chất có những đặc tính rất đặc biệt trong nuôi cấy mô mà từ trước đến giờ hầu như ít người nuôi cấy mô chú ý đến. Bạn xem thử file đính kèm xem sao
 
cho mình hỏi thêm là giồng trong nuôi cấy mô thì khoảng bao lâu nó bị thoái hoá? dến bây giờ thì mình vẫn chưa tìm ra được nguyên nhân gây chết cây nữa nè?
 
Mình chưa có thời gian đọc những tài liệu bạn gửi. tuy nhiên có thấy bạn dùng than hoạt tính.
Than hoạt tính là một chất đc dùng khá phổ biến trong nuôi cấy mô tế bào. Tuy nhiên đây là một con giao 2 lưỡi. Nó không chỉ hấp thụ những chất độc đối với mẫu nuôi mà còn hấp thụ cả những chất dinh dưỡng có trong môi trương nuôi cấy. Vì vây bạn cần xem lại nồng độ sử dụng. Mặt khác khi sử dụng than hoạt tính, pH của môi trương bị giảm xuống rất thấp, vì vậy trong quá trình đo pH cần lưu ý đến thao tác đo pH để tránh cho môi trường có một lượng muôi cao NaCl cao. Vì đối với một số loài lan lượng muối này là có hại. (khát nước đòi uống lavie). Một điều nữa là bạn sử dụng môi trường nền là MS, đây là ?môi trường kinh điển tuy nhiên trong môi trường này lượng nitơrat rất cao , và theo như mình biết thì không tốt với lan. Bạn thử chuyển sang một môi trường đặc hữu cho lan như Vacin&Went, Knudson C v.v..
Trên đây la thiển nghĩ của minh. Mong mọi người góp ý và không chê cười.
 

Facebook

Top