anh chị ơi em là thành viên mới xin mọi người chỉ giáo, em đang muốn gửi mẫu để phân tích DGGE nhưng không biết trữ mẫu thế nào ạ ? mẫu của em là mẫu nước và mẫu bùn, mong mọi người giúp em ạ
thank mọi người nhiều
Ui, tuy trả lời hơi muộn nhưng biết đâu có người cần.
Bên mình (viện Hàn lâm KH và CN, Hà Nội) có chạy điện di PCR-DGGE nhé. Mục đích phân tích đa dạng quần xã vi khuẩn (16S) hoặc nấm (ITS). Bản DGGE sẽ tách các băng DNA có cùng kích thước (điện di agarose thường không tách được), về lý thuyết, mỗi băng là đại diện 1 loài vi sinh.
Chạy DGGE cũng để so sánh sự giống/khác nhau của các quần xã của các mẫu (có thể khác nhau địa lý, hoặc cùng địa lý, nhưng thu hoạch ở thời gian khác nhau).
chạy DGGE để phát hiện sự có mặt của chủng nào đó trong hệ sinh thái (nếu có chủng chuẩn, ví dụ Bacillus sp.xxx) khi bón vào môi trường (vdu phân bón hữu cơ, kiểm tra xem có sự phát triển của con bón vào không v.v..).
Khi chạy điện di xong, trên bản gel phân tách khoảng 10-50 band DNA.
+ Quan tâm band nào thì cắt ra để PCR-sequencing band đó để xác định vị trí phân loại.
+ so sánh sự giống/ khác nhau về profile của các đường chạy,
+ Hoặc xem các band đó thay đổi như thế nào theo thời gian.
Thời gian từ lúc có mẫu đến kết thúc TN: tách DNA tổng 1 ngày, PCR vòng 1 1 ngày, PCR vòng 2, 1 ngày; chạy điện di , 1 ngày... Nếu làm chuẩn thì sau 3 ngày có kết quả.