Go Back   Diễn đàn Sinh học Việt Nam > Phòng thí nghiệm > Công nghệ tế bào, mô, phôi

Trả lời
 
Ðiều Chỉnh Xếp Bài
Old 16-05-07, 08:01   #1
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post

Hiện mình đang nuôi cấy tế bào Vero nhưng còn thiếu kinh nghiệm nhiều. Bạn nào có thể giúp mình có những tài liệu về nuôi cấy loại tế bào này được không? Nhất là phần đặc điểm của nó.
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn

Sponsored Links
Old 16-05-07, 17:54   #2
Nguyễn Ngọc Lương
Administrator
 
Nguyễn Ngọc Lương's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2005
Đến từ: Đại học Huế
Bài gửi: 2,143
Thanks: 157
Thanked 716 Times in 424 Posts
Bạn thiếu kinh nghiệm gì?
Nuôi tế bào quan trọng nhất là đừng để cho nó nhiễm.
Tế bào Vero thì quá quen thuộc rồi. Bạn vào ATCC đánh Vero nó lên một loạt dòng cho bạn. Bạn kiểm tra xem Vero của mình thuộc dòng nào. Có lẽ các dòng Vero cũng không khác nhau nhiều lắm.
Nếu không bạn cũng có thể tự dựng đường cong tăng trưởng của nó rồi dựa vào đó mà nuôi thôi.
Quan trọng nhất vẫn là: good aseptic techniques = kỹ thuật vô trùng tốt.
Tài liệu nuôi cấy tế bào nói chung thì bạn có thể xin lab C cuốn e-book: Animal cell culture a manual of basic techniques 5th edition của I. Freshney.
__________________
Molecular biology is deceptively simple.
Method is everything but the devil is in the detail
Molecular biology and religion have one thing in common: you must have faith in what you can not see
Nguyễn Ngọc Lương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 16-05-07, 22:30   #3
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
Thread starter
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post
Uhm, cám ơn những kinh nghiêm chia sẻ của bạn.
Theo bạn nói thì mình có thể dựng đường cong trước rồi trang web Atcc có thể thiết kế qui trình nuôi cho mình a? Mình nuôi trong plate 6 giếng thường hay bị hiện tượng tế bào không phát triển tốt, lúc tróc bằng trypsin nó giống như là một sợi chỉ, kéo thành một sợi dài tế bào. không hiểu vì sao?????
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 16-05-07, 23:18   #4
Nguyễn Ngọc Lương
Administrator
 
Nguyễn Ngọc Lương's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2005
Đến từ: Đại học Huế
Bài gửi: 2,143
Thanks: 157
Thanked 716 Times in 424 Posts
Ý tôi muốn nói: nếu bạn đã có đủ thông tin đầy đủ về dòng tế bào của bạn thì cứ theo đó mà nuôi (môi trường gì, CO2 hay không CO2, mấy ngày thay môi trường, mấy ngày cấy chuyền, mật độ cấy...v.v). Nếu bạn nuôi môi trường khác người ta thì tự dựng lại đường cong rồi dựa vào đó mà nuôi.
Hiện tượng của bạn cũng thường gặp thôi. Bạn lấy pipetteman bơm vài lần cho tế bào nó tách nhau ra, quan sát lại dưới kính hiển vi xem còn cụm tế bào nào không. Nếu còn thì tiếp tục bơm.
Thông thường dạng này thường gặp khi tế bào của bạn bị để quá confluent, mọc chồng lên nhau luôn. Nếu vậy cấy truyền trước khi tế bào mọc kín sẽ đỡ bị cụm tế bào hơn. Ngoài ra khi cho trypsin vào tránh đụng chạm mạnh vào bình nuôi. Để yên khoảng 15-20 giây, đổ trypsin ra rồi đem ủ 37 độ trong 10-15 phút.
Nếu vẫn có hiện tượng đó xem lại trypsin. Sách nói khi chế trypsin phải đánh tới 1 tiếng đồng hồ mới tan hết đấy. Nếu không ngại EDTA gây độc tế bào của bạn thì tăng hàm lượng EDTA lên cũng giảm cụm tế bào nhiều hơn. Trypsin nên xài trong khoảng 2-3 tuần thôi. Nếu không xài hết đem chia nhỏ, cất ở -20 độ để kéo dài thời gian sử dụng.
Trang web ATCC chứa thông tin về các dòng tế bào phổ biến, ví dụ một dòng Vero của bạn nè:
http://www.atcc.org/common/catalog/n...ccNum=CRL-1586
__________________
Molecular biology is deceptively simple.
Method is everything but the devil is in the detail
Molecular biology and religion have one thing in common: you must have faith in what you can not see
Nguyễn Ngọc Lương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 10:14   #5
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
Thread starter
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post
Theo bạn, sự thay đổi màu sắc trong quá trình nuôi tế bào là do những nguyên nhân nào? Theo tôi biết có thể là do sự thay đổi pH hoặc nhiễm khuẩn. Vậy có cách nào xác định chính xác tác nhân làm màu sắc môi trường của mình thay đổi đượckhông? trường hợp nhiễm mycoplasma thì giải quyết như thế nào?
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 11:12   #6
Nguyễn Ngọc Lương
Administrator
 
Nguyễn Ngọc Lương's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2005
Đến từ: Đại học Huế
Bài gửi: 2,143
Thanks: 157
Thanked 716 Times in 424 Posts
Thay màu môi trường nuôi thì chắc chắn là pH thay đổi rồi. Còn vì lý do gì thì bạn tự quyết định lấy. Thay đổi đột ngột = nhiễm khuẩn nặng (nếu kèm theo đục môi trường nữa). Mycoplasma thì không làm thay đổi pH nhanh như vậy. Muốn kiểm tra nhiễm mycoplasma bạn làm một test mycoplasma thôi. Nhiễm mycoplasma rồi thì "yục" đi chứ còn làm gì nữa. Tất nhiên nếu là "của hiếm" thì cũng xử lý kháng sinh xem sao.
Thực tế tôi chưa làm test mycoplasma lần nào, vì với đk phòng thí nghiệm không nhiễm mycoplasma mới là chuyện lạ. Chẳng lẽ làm ra kết quả positive rồi thì không lấy nữa à? Thực tế theo thống kê hơn 50% lab ở Mỹ cũng không kiểm tra mycoplasma contamination thường xuyên (1 năm 2 lần). Khi nào có lab tốt hẵng lo mycoplasma.
Những điều bạn hỏi toàn là cơ bản cả. Bạn nên kiếm sách mà đọc. Khi nào thực sự khó khăn trong thực nghiệm thì mới nên đi hỏi. Cuốn I. Freshney Culture of Animal cells trả lời tất cả những câu hỏi bạn đặt ra đấy.
__________________
Molecular biology is deceptively simple.
Method is everything but the devil is in the detail
Molecular biology and religion have one thing in common: you must have faith in what you can not see
Nguyễn Ngọc Lương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 13:42   #7
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
Thread starter
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post
Trong cuốn Current protocols of cell culture có phần test mycoplasma, ko cần dùng bộ kit dắt tiền đâu. Chỉ cần có môi trường xài cho myco thui
Bạn tham khảo thử coi sao.
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 14:21   #8
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
Thread starter
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post
Ủ trípin cho tế bào Vero theo thời gian bạn nói thì tế bào nó chít hết mất.
Mình hcỉ ủ 5 phút là tối đa. Cũng tùy nữa xem nó dày mỏng thế nào nữa
Cuốn của Fresley mình cũng đọc rùi
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 16:25   #9
Nguyễn Ngọc Lương
Administrator
 
Nguyễn Ngọc Lương's Avatar
 
Tham gia ngày: Nov 2005
Đến từ: Đại học Huế
Bài gửi: 2,143
Thanks: 157
Thanked 716 Times in 424 Posts
Tôi nhắc lại những điều bạn hỏi rất cơ bản. Bạn tiếp tục hỏi như vậy chẳng ai trả lời bạn nữa đâu.
Nếu bạn đọc cuốn Freshney rồi có lẽ chẳng cần đi hỏi tôi nữa. Chúc vui.
__________________
Molecular biology is deceptively simple.
Method is everything but the devil is in the detail
Molecular biology and religion have one thing in common: you must have faith in what you can not see
Nguyễn Ngọc Lương is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Old 17-05-07, 17:22   #10
Nguyễn Phạm Minh Hoàng
Registered Users
Thread starter
 
Nguyễn Phạm Minh Hoàng's Avatar
 
Tham gia ngày: May 2007
Đến từ: Lớp 03SH - khoa Sinh, trường ĐH Khoa học Tự nhiên
Bài gửi: 9
Thanks: 0
Thanked 1 Time in 1 Post
Có lẽ bạn Lương hơi thiếu kinh nghiệm trong việc chia sẻ kinh nghiệm rối. Có những vấn đề không thể chỉ dựa vào lý thuyết suông trên sách vở có thể giải thích đươc khi bạn thực sự gặp phải khi nuôi cấy. Tôi đã đọc rất nhiều về Vero, kể cả những serious problems trong nuôi cấy nhưng vẫn cảm thấy mình là thiếu kinh nghiệm để có thể học hỏi và chia sẻ kinh nghiệm từ người khác. Thanks for your experiences.
Những bạn nào có gặp những vấn đề về nuôi cấy có thể chia sẻ và học hỏi kinh nghiệm với nhau.
Mong nhận được nhiều sự đóng góp của các bạn.
Nguyễn Phạm Minh Hoàng is offline   Trả Lời Với Trích Dẫn
Trả lời

Ðiều Chỉnh
Xếp Bài

Chuyển đến

Similar Threads
Ðề tài Người gửi Chuyên mục Trả lời Bài mới gởi
Cùng chia sẻ kinh nghiệm nuôi cấy tế bào động vật Nguyễn Thị Phương Trang Công nghệ tế bào, mô, phôi 32 28-02-09 09:38
Chia sẻ tài liệu, kinh nghiệm,... du học! Hoàng Anh Hoàng Du học & Việc làm ngành CNSH 29 06-10-08 14:22
Kinh nghiệm xin học bổng Nguyễn Thị Thanh Vân Thảo luận chung 16 12-10-06 19:13
Cơ chế thần kinh của các chất gây nghiện Đào Anh Phúc Động vật 8 03-08-06 21:04
Hỏi về kinh nghiệm thu thập mẫu vật côn trùng trong rừng Hoàng Đức Minh Động vật 4 14-07-06 19:34


vB 3.8.7 Copyright © 2000 - 2017, Jelsoft Enterprises Ltd.